[发明专利]一种海藻酸钠/穿膜肽/质粒三元纳米复合物疫苗及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种海藻酸钠/穿膜肽/质粒三元纳米复合物疫苗及其制备和应用。该三元纳米复合物疫苗由海藻酸钠、穿膜肽和质粒组成，其中，海藻酸钠与穿膜肽的质量比为1‑5:1，穿膜肽与质粒的质量比为5‑400:1；其可用于制备质粒口服药物，为口服递送质粒提供了新的思路。其制备方法是通过静电吸附介导层层组装得到海藻酸钠/穿膜肽/质粒三元纳米复合物疫苗，制备条件温和、制备过程容易控制、制备方法简单，所得复合物的粒径均一稳定，有利于工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物医药复合物技术领域，具体涉及一种海藻酸钠/穿膜肽/质粒三元纳米复合物疫苗及其制备和应用。

背景技术

肿瘤是全球人类第二大死因。近几年来，基于肿瘤疫苗的多种免疫手段已经在研究当中，如抗原特异性肿瘤疫苗、树突状细胞疫苗和全细胞疫苗等，都是比较有前景的治疗手段(Experimental dermatology.2001；10:143-154.)。尽管基于细胞的疫苗是目前临床实验中肿瘤疫苗的主要形式，但抗原特异性疫苗能够产生针对特定肿瘤抗原的免疫应答，从而提供一个更精准的抗肿瘤免疫反应，目前已有少数肿瘤相关抗原表位被识别并进入临床试验阶段，如保守表达黑色素瘤前黑素小体蛋白gp100、酪氨酸酶相关蛋白(TRP-1、TRP-2)、T细胞识别的黑色素瘤抗原(MART-1)(Nature medicine.1998；4:525-531.)。

在抗原特异性肿瘤疫苗中，编码肿瘤抗原的DNA疫苗由于有着众多优点而受到关注，如在质粒上能够编码多个抗原基因从而表达多个抗原；与其他核酸载体相比，质粒通常不含病毒或细菌抗原；具有结合活减毒疫苗和重组病毒疫苗的优势，没有常见的与活减毒疫苗安全方面和制备相关的问题。目前已有二种DNA疫苗(OSE-2101和VGX-3100)进入III期临床试验(U.S.Patent Application 15/578,721[P].2018-6-21；Gynecologic Oncology；2018,149:225-226.)。但是目前非细菌载体的黑色素瘤DNA疫苗均是通过非口服途径如静脉注射和皮下注射，如脂质体、免疫佐剂复合物，需要外界超声和免疫佐剂的辅助(Molecular pharmaceutics.2011,8:543-554.；Biomaterials.2016,86:83-91.)，导致患者依从性、便利性差；并且注射剂的处方纯化及医护人员的培训等环节增加了成本，不利于DNA疫苗的发展。

口服疫苗是一种理想的给药方式，患者依从性好，而且肠道面积大，固有层中有很多抗原呈递细胞和T淋巴细胞。一旦抗原进入到固有层，被抗原呈递细胞捕获，便能呈递激发后续免疫应答。但是，口服DNA疫苗将会遇到很多生理屏障。首先是质粒在胃酸中的稳定性。然后是肠道粘液层，粘液层厚度从10μm到170μm不等，穿过粘液层需要粒子有着亲水、非阳离子表面。随后是肠上皮细胞层，一般来说表面带正电的粒子能够增加跨膜转运效率。因此，穿透粘液层和肠上皮细胞层需要不同的粒子表面特性，这为口服疫苗的研究带来了难度。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种海藻酸钠/穿膜肽/质粒三元纳米复合物疫苗及制备和应用。