[发明专利]一种动物毛发皮质醇检测的预处理方法在审
| 申请号： | 201910811880.3 | 申请日： | 2019-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN110530694A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 陈珉;童梦晨;林伊 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N33/74;G01N33/558;G01N33/531 |
| 代理公司： | 31257 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 董红曼<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 毛发 预处理 皮质醇 去角质 磨碎 磷酸缓冲盐溶液 干燥萃取液 动物毛发 毛发样品 清洁毛发 实验效率 萃取步骤 溶质 液氮 野生动物 清洁 检测 节约 | ||
1.一种动物毛发皮质醇检测的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：获得毛发样品；
步骤二：清洁毛发并去角质化；
步骤三：利用液氮冷冻，在研钵中磨碎清洁并去角质化后的毛发；
步骤四：萃取步骤三中磨碎的毛发；
步骤五：离心，取上清，干燥萃取液所得的溶质并加入磷酸缓冲盐溶液。
2.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤一中，通过非损伤方式获得毛发样品，收集动物脱落毛发样品不少于50mg，并可以接受有一定污染的毛发样品。
3.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤二中，先使用蒸馏水进行毛发的清洗，后使用异丙醇进行去角质化。
4.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤二中，所述去角质化后的毛发在室温下进行干燥。
5.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤三中不使用剪刀剪碎毛发而是经过液氮冷冻后直接利用简单易得的研钵进行粉碎样品。
6.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤四中，所述萃取的具体步骤为：使用无水甲醇按照每50mg毛发1ml无水甲醇的比例在室温下于旋转混匀仪上以40rpm进行24h萃取。
7.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤五中，所述干燥在通风橱内65℃水浴中进行。
8.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，步骤五中，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01M；所述磷酸缓冲盐溶液的pH＝7.2-7.4；在65℃水浴条件下溶解溶质。
9.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述步骤五之后还包括步骤六：将溶解在磷酸缓冲盐溶液中的溶质保存于-20℃冰箱至检测日。
10.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述步骤五之后还包括步骤七：使用ELISA试剂盒对溶质中的皮质醇进行测定。
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