[发明专利]一种鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：(1)利用鸭呼肠孤病毒灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为1～3％的柠檬酸及1～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，低温放置3～6h，1～5℃离心，收集上清液；(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。本发明所公开的鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法，步骤简单，效率及得率高，添加少，经济适用。

技术领域

本发明涉及一种鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法。

背景技术

鸭呼肠孤病毒目前是世界上的研究热点，对鸭具有致病性，主要病变表现为脾脏坏死和肝脏出血，该病可直接引发养鸭场15日龄以内的雏鸭出现30％以上的死亡率，此外其临床上也常常与鸭疫李默是杆菌，大肠杆菌和鸭星状病毒等并发感染，导致种蛋鸭出现明显呼吸道病，关节炎，及严重的产蛋下降及畸形蛋等问题。因此目前该病已经成为严重影响养鸭场生产性能的重大疫病之一。

卵黄抗体(IgY)是母禽被外来抗原刺激后，母禽血液中免疫球蛋白转移至其卵黄中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白，是在卵黄内所产生的特异性抗体，其浓度远高于血清，并具有高度稳定性和生物学活性，这使应用卵黄抗体防病治病成为可能。

如CN108912227A公开了一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用，制备方式为由高免蛋收集卵黄，经一次灭活、酸化萃取、二次灭活、粗滤、除菌过滤、浓缩和三次灭活后制备成防治新型鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体。操作流程复杂，耗时长。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯度、收率高，活性强、易于制备与应用且经济的鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明公开一种鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：

(1)利用鸭呼肠孤病毒灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；

(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；

(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为1～3％的柠檬酸及1～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，1～5℃放置3～6h，1～5℃离心，收集上清液；

(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。

所述步骤(3)蛋黄液与纯化水以1:2的体积比混合；搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为1.5％的柠檬酸及2％的聚阴离子纤维素；低温放置温度为3℃，放置时间为5小时；低温离心条件为3℃11000r/min离心25分钟。

所述步骤(1)中的鸭呼肠孤病毒灭活疫苗，其为用传代细胞系LMH细胞生产的鸭呼肠孤病毒灭活疫苗。

所述步骤(2)蛋黄液的获得优选为：将高免鸡蛋用75％酒精进行表面消毒，分离出蛋黄，过60目尼龙筛去除卵黄膜和系带，然后置于胶体磨中研磨5min，即得蛋黄液。