[发明专利]一种新型溶瘤病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为包含SEQ ID NO:1所示AIF-GM-CSF目的基因的重组痘苗病毒天坛株，命名为rTV-AIF-GM-CSF，其保藏编号为：CCTCC NO:V201959，保藏日期为2019年8月22日，保藏地址为中国典型培养物保藏中心。

2.权利要求1所述溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物方面的应用，其中所述肿瘤选自前列腺癌以及肺癌。

3.一种溶瘤病毒的制备方法，包括以下步骤：

(1)合成人AIF-GM-CSF，其基因序列如SEQ ID NO：1所示；

(2)将AIF-GM-CSF亚克隆至痘苗病毒穿梭质粒pSC65的TK区中，构建出重组质粒pSC65-AIF-GM-CSF；

(3)采用基因同源重组的方式，将pSC65-AIF-GM-CSF质粒转染到已经感染了野生型痘苗病毒的TK143细胞中，使两者同源重组，产生重组痘苗病毒rTV-AIF-GM-CSF；经筛选后，获得所述TK区包含SEQ ID NO：1所示的AIF-GM-CSF的编码序列的重组溶瘤痘苗病毒；其中，AIF-GM-CSF基因由痘苗病毒的早/晚期启动子p7.5 控制；

（4）对获得的重组溶瘤痘苗病毒进行扩增。

4.根据权利要求3所述溶瘤病毒的制备方法，其特征在于，重组溶瘤痘苗病毒进行扩增具体步骤包括：Vero细胞生长密度达接近100％时滴入AIF-GM-CSF重组痘苗病毒天坛株，更换低浓度胎牛血清的维持培养基，每10 cm 培养板接种量为0.02 MOI溶瘤痘苗病毒，放入孵箱培养,重组痘病毒扩增完毕后，收集病毒液再反复冻融后，用蔗糖溶液进行密度梯度离心纯化。