[发明专利]肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法

说明书

本发明提供了一种简单、有效的肺炎球菌荚膜染色方法。改进了现有荚膜染色的众多缺点。其特征是：改良后的染色方法具有操作简便、节省染料、易于观察等特点，可以取得比传统荚膜染色法更好的染色效果，提高了细菌染色的质量，简便的操作程序，不仅适用于微生物实验教学，也便于批量制作教学标本，值得在教学、科研、临床上的推广。

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及一种肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法。

背景技术

荚膜肿胀试验是利用特异性抗血清与相应细菌的荚膜抗原特异性结合形成复合物，用以检测肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。

目前的荚膜染色和荚膜肿胀染色方法包括：

1、Hiss氏荚膜染色法

染液：a、结晶紫染色液：结晶紫乙醇饱和液(2g结晶紫溶于20ml 95％乙醇中)5ml，加水95ml；b、20％硫酸铜染液

方法：a、细菌涂片，空气自然干燥，乙醇固定；b、滴加Hiss染色液于玻片上，火焰上加热使有蒸汽冒出为止或者染色，勿水洗；c、用20％硫酸铜溶液冲洗，勿水洗；d、自然晾干或者吸水纸吸干，在油镜下观察荚膜

结果：荚膜为淡紫色或蓝色，菌体为紫色。

2、改良Hiss氏荚膜染色法

染液：a、结晶紫染色液：结晶紫乙醇饱和液(2g结晶紫溶于20ml 95％乙醇中)5ml，加水95ml；b、20％硫酸铜染液。

方法：a、细菌涂片，空气自然干燥，甲醇固定；b滴加Hiss染色液于玻片上色2min，勿水洗；c用20％硫酸铜溶液冲洗，勿水洗；d自然晾干或者吸水纸吸干，在油镜下观察荚膜。

结果：荚膜呈浅红色，菌体呈深蓝紫色，背景为均匀一致的浅紫色。

3、荚膜肿胀染色

染液：1％亚甲基蓝溶液

方法：a、取2片载玻片，分别滴加肺炎链球菌培养液5μl；b、分别滴加相应的肺炎血清和0.85％氯化钠注射液与菌液混合；c、分别向混合液滴加5μl 1％亚甲基蓝染色液并混匀，加盖盖玻片，湿盒中室温静置5-10分钟后置显微镜油镜下观察。

结果：菌体周围可见界限清晰、无色环状带，即肿胀的荚膜，判为阳性；菌体周围无可见界限清晰的无色环状带，即为荚膜肿胀阴性。

但是，以上方法在实际操作过程中无法得到准确的检测结果，成功概率较低，经常会出现菌体与血清发生凝集，聚团；菌体在液体内漂浮无法观测；细菌周围染液颜色太浅无法看到荚膜等现象，如此一来大大的降低了检测的准确率和稳定性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法，通过该方法能够得到准确度高、稳定性好的检测结果。

本发明所述的荚膜肿胀染色方法，包括以下步骤：

1)取2片载玻片，分别滴加肺炎链球菌培养液；

2)分别滴加相应的肺炎链球菌特异性抗血清和氯化钠注射液与菌液混合，分别使用微量移液器枪头充分搅匀，并将液滴平铺，室温放置反应，自然晾干，经火焰固定；

3)染色，滴加草酸铵结晶紫染液或亚甲基蓝染液，水洗，吸水纸吸干水分；

4)负染，吸取一滴墨汁滴加到载玻片一侧，倾斜样品载玻片，用另一块载玻片接触墨汁并与样品载玻片成45度角，轻轻的向斜下方拉，使得墨汁覆盖染色面，最后室温自然干燥；

5)镜检，油镜观察。

本发明所述的荚膜肿胀染色方法，还包括进一步的判断过程：