[发明专利]肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法在审
| 申请号： | 201910798783.5 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110501336A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 王瑞峰;胡国伟;朱卫华;杜琳 | 申请（专利权）人： | 北京智飞绿竹生物制药有限公司;重庆智飞生物制品股份有限公司;安徽智飞龙科马生物制药有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/84 | 分类号： | G01N21/84;G01N1/30 |
| 代理公司： | 11130 北京华科联合专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 王为;孟旭<国际申请>=<国际公布>=< |
| 地址： | 100176 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荚膜染色 微生物实验 操作程序 肺炎球菌 教学标本 批量制作 染色效果 细菌染色 染色法 染料 染色 荚膜 教学 改良 观察 科研 改进 | ||
1.一种肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取2片载玻片，分别滴加肺炎链球菌培养液；
2)分别滴加相应的肺炎链球菌特异性抗血清和氯化钠注射液与菌液混合，分别使用微量移液器枪头充分搅匀，并将液滴平铺，室温放置反应，自然晾干，经火焰固定；
3)染色，滴加草酸铵结晶紫染液或亚甲基蓝染液，水洗，吸水纸吸干水分；
4)负染，吸取一滴墨汁滴加到载玻片一侧，倾斜样品载玻片，用另一块载玻片接触墨汁并与样品载玻片成45度角，轻轻的向斜下方拉，使得墨汁覆盖染色面，最后室温自然干燥；
5)镜检，油镜观察。
2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，还包括进一步的判断过程：
肺炎链球菌菌体染成紫红色或蓝色，菌体外有一无色透明荚膜区，背景为黑色，菌体、背景、荚膜对比非常明显，判为阳性；
肺炎链球菌菌体染成紫红色或蓝色，菌体外无法看到透明的荚膜区，黑色背景与菌体相连，即为荚膜肿胀阴性对照。
3.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，其中，氯化钠注射液的浓度为0.9％。
4.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，其中，墨汁的浓度为10％。
5.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取2片载玻片，分别滴加肺炎链球菌培养液5μl；
2)分别滴加不同肺炎链球菌型别所对应的肺炎链球菌特异性抗血清5μl和氯化钠注射液5μl与菌液混合，分别使用微量移液器枪头充分搅匀，并将液滴平铺，室温放置反应，自然晾干，经火焰固定；
3)染色，滴加草酸铵结晶紫染液或亚甲蓝染液染色1分钟，水洗，吸水纸吸干水分；
4)负染，吸取一滴墨汁滴加到载玻片一侧，倾斜样品载玻片，用另一块载玻片接触墨汁并与样品载玻片成45度角，轻轻的向斜下方拉，使得墨汁覆盖染色面，最后室温自然干燥；
5)镜检，油镜观察；
本发明所述的荚膜肿胀染色方法，还包括进一步的判断过程：
肺炎链球菌菌体染成紫红色或蓝色，菌体外有一无色透明荚膜区，背景为黑色，菌体、背景、荚膜对比非常明显，判为阳性；
肺炎链球菌菌体染成紫红色或蓝色，菌体外无法看到透明的荚膜区，黑色背景与菌体相连，即为荚膜肿胀阴性对照。
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