[发明专利]一种兼有IgG结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白及其ELISA试剂盒

说明书

本发明属于基因工程领域。具体而言，本发明提供一种兼有IgG结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白及其ELISA试剂盒，尤其涉及密码子优化的一种兼有IgG结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白G‑SA，包括链球菌蛋白G（SPG）片段和SA蛋白。本发明提供的ELISA试剂盒的特异性、敏感性和稳定性较好，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别涉及一种兼有IgG 结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白G-SA及其ELISA试剂盒。

背景技术

目前，感染人类的吸虫有三种：即分布于亚洲的日本血吸虫，非洲中部及拉丁美洲的曼式血吸虫和非洲北部的埃及血吸虫，在中国仅日本血吸虫流行，分布于我国长江流域及南方12省，市，自治区，多为我国很重要的农业生产基地，日本血吸虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病，对人民的健康及国家发展危害严重。

血吸虫病诊断技术主要包括病原学诊断和免疫学诊断两种，病原学诊断技术以粪便等样本中检查虫卵或孵化毛蚴为手段，但该法检出率较低，对轻度感染或早期感染的检测漏检率极高，不利于疾病的早期诊断。免疫学诊断技术检测主要包括抗原和血清抗体，相比病原学诊断技术具有简便，高效，依从性高等优势，日益受到重视并在业界研发下发展迅速。

链球菌蛋白G是一种能够和多种哺乳动物的IgG以及人血清白蛋白(HSA)相结合的蛋白质，SPG同IgG的亲和力强，结合谱广。研究表明，SPG的三个同源的氨基酸序列C1、C2和C3区域与抗体IgGFc端的结合相关，并且C3区与抗体IgG的结合能力相当于C1区的7倍（Kobatake，1990）。而SPG的A、B区则具有与抗体Fab段结合以及与血清白蛋白结合的活性，被认为会起到干扰抗体与抗原的作用以及带来非特异性反应的问题。

链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌Streptomycesavidinii分泌的一种四聚体蛋白，与亲和素(avidin，AV)有相似生物学特性。SA可高度特异性地与生物素结合，一分子链霉亲和素可以与四分子生物素结合，形成生物素-链霉亲和素系统。该系统被认为是最稳定的非共价相互作用之一，并在生物技术领域具有广泛的应用，如分子标记、分子定位和靶向药物递送。

酶联免疫吸附试验是免疫学诊断技术的一种，该方法具有高度特异性，敏感性，检测结果与粪检阳性符合率达95%-99%。ELISA技术飞速发展，出现了诸多衍生试验，如快速ELISA，微波ELISA，Dot-ELISA等均具有良好的特异性和敏感性。

BSA系统作为ELISA法的一种，可显著提高标记免疫检测的灵敏度，在免疫学领域应用广泛。但是常规的BSA法同样不可避免的用到酶标的二抗，根据不同物种来源的一抗，二抗也需要做相应的调整，增加了实验成本也给实验结果准确性带来影响。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种快速、高灵敏的免疫检测产品及方法，实现高效、高密度的免疫检测。

为了实现上述技术方案，本发明提供一种融合蛋白，基于SPG C3区和SA的特点，将这两段基因连接起来，重构一种兼有IgG 结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白G-SA。

为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种兼有IgG 结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白G-SA，包括链球菌蛋白G（SPG）片段和SA蛋白，所述链球菌蛋白G（SPG）片段为含有SPG的C3区段的序列；

其中，链球菌蛋白G（SPG）片段和SA蛋白之间的连接序列为如SEQ ID NO.8所示

所述链球菌蛋白G（SPG）片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

SA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述双功能蛋白G-SA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；