[发明专利]基于普通PCR技术的舞毒蛾快速鉴定引物及其应用、鉴定方法

权利要求书

1.基于普通PCR技术的舞毒蛾快速鉴定引物，其特征在于包括上游引物LD-F12以及下游引物LD-R1和LD-R2，所述LD-F12的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述LD-R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述LD-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的引物在快速鉴定毒蛾属舞毒蛾中的应用。

3.基于普通PCR技术快速鉴定毒蛾属舞毒蛾的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取上游引物LD-F12以及下游引物LD-R1和LD-R2，将上述引物进行组合LD-F12/ LD-R1和LD-F12/LD-R2，分别对舞毒蛾种群和舞毒蛾近缘种进行特异性PCR扩增；

2）取扩增产物进行电泳，染色，成像分析，若引物LD-F12/LD-R1扩增得到的长度约为528bp产物，引物LD-F12/LD-R2扩增得到长度约为756bp的产物，即鉴定为舞毒蛾。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1）中PCR反应体系为20μL，包括1 μL模板DNA，10 μM上下游引物各0.4μL， 2.5mM dNTPs1.6μL，2 μL 10 × PCR buffer，5 U/μLTaqDNA polymerase0.1 μL，13.5 μL ddH₂O， PCR buffer含有Mg^{2 +}；PCR反应条件为：94ºC预变性3 min；然后进入循环，94 ºC变性30 s，54ºC退火30 s，72ºC延伸1 min，35个循环；最后72ºC延伸10 min。