[发明专利]用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的PCR扩增引物对、及其制备的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的PCR扩增引物对，该PCR扩增引物对的上游引物如SEQ.ID.NO.1所示，其下游引物如SEQ.ID.NO.2所示。本发明还提供了含有该PCR扩增引物对的用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的试剂盒，本发明的试剂盒检测灵敏度高，能在感染或免疫早期即能检测，能同时鉴别检验非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失疫苗株，且对不同地域的野毒株均能有效检测。

技术领域

本发明属于病毒的检测领域，具体涉及用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的PCR扩增引物对，以及包含该PCR扩增引物对的试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起的猪的一种烈性、高度接触性传染病。非洲猪瘟病毒是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒，其基因组长约170kb～193kb。ASF具有高发病率、高死亡率等特点，一旦发生，经济损失巨大；目前缺乏有效疫苗和特异性治疗手段，使ASF成为目前危害养猪业的最严重疫病之一。目前对ASF的控制只能依赖实验室的快速诊断、对发病动物的捕杀，以及采取有效的检疫措施和严格的卫生措施。

目前，ASF在我国首次爆发，国内多个地区流行，疫情持续扩大。有效疫苗的研发成为防控疫情的可能手段，鉴于目前全病毒灭活疫苗不能引起有效免疫反应，基因缺失活疫苗成为另一种可能的选择，为针对基因缺失活疫苗和野毒株的区分鉴别，现有技术中急需提供一种简便、准确的检测方法以及其相应的检测物质。

发明内容

本发明的目的是提供鉴别检验非洲猪瘟病毒株的PCR引物，该引物具有特异性强、敏感性高等优点。

为此，本发明提供了一种用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的PCR扩增引物对，其中，所述PCR扩增引物对的上游引物如SEQ.ID.NO.1所示，其下游引物如SEQ.ID.NO.2所示。

本发明首次公开了用于鉴别检验非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的PCR引物对，能同时鉴别检验非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失疫苗株，特异性强、灵敏度高；且对不同地域来源的野毒株均能有效检测。

本发明还提供了一种用于鉴别检验非洲猪瘟病毒的试剂盒，其中，所述试剂盒包括所述的PCR扩增引物对。

本发明的针对必需毒力基因缺失鉴别检验的试剂盒，能有效区分疫苗株和野毒株，提供了疫病精确监测和精准防控疫情的关键技术。由于本发明PCR检测引物对具有特异性强、敏感性高的特点，包含本发明引物对的试剂盒灵敏、便捷、特异性强、敏感性高、可靠性好，只需一次检测便能准确鉴定样本是含有非洲猪瘟病毒疫苗株或野毒株，可以同时进行大批量的样本分析，为非洲猪瘟病毒疫情的监测、防控提供有力的技术支持。

作为本发明的一种实施方式，本发明所述的试剂盒中，所述试剂盒还包括Taq DNA聚合酶、5×反应缓冲液、dNTPs、ddH₂O。

本发明试剂盒不仅特异性强、敏感性高，且能针对多种样本进行检测，不仅能应用于血清样本，还能应用于肝脏、淋巴结、流产胎儿、脾脏、肺、肾脏多种组织。

作为本发明的一种优选实施方式，本发明所述的试剂盒中，所述Taq DNA聚合酶浓度为5U/μl，5×反应缓冲液为5×Tris-HCl(pH8.3)，浓度为50mM，dNTPs浓度为2.5mM，所述上游引物浓度为10μΜ，所述下游引物浓度为10μΜ。

本发明的试剂盒灵敏度高，可用于非洲猪瘟感染早期的临床检测。

作为本发明的一种实施方式，本发明所述的试剂盒中，所述试剂盒还包括酶混合液和PCR反应液；其中，所述酶混合液由Taq DNA聚合酶、Tris-HCl、EDTA、DTT、甘油和Tween-20组成，所述PCR反应液由所述扩增引物对(其中上游引物、下游引物体积比为1:1)、5×反应缓冲液(5×Tris-HCl50mM)、dNTPs和ddH₂O组成。