[发明专利]一种具有绿色荧光活性的多物种通用检测蛋白及其应用

权利要求书

1.一种具有绿色荧光活性的检测蛋白，其特征在于所述检测蛋白是将SPG基因的IgG结合片段进行重构，只保留蛋白G能与抗体IgG的Fc端特异性相结合的C3区，并将其分为三组，C3、C3-D-C3、C3-D-C3-D-C3，并都连接EGFP，制备的重组蛋白具有荧光活性和与不同物种抗体结合的双重活性。

2.如权利要求1所述的检测蛋白，所述链球菌蛋白G（SPG）片段为含有SPG的C3区段的序列，优选为C3、C3-D-C3、C3-D-C3-D-C3中的一种，所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白，其中优化后的IgG结合片段C3核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；优化后的SPG基因的D片段核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；优化后的C3与EGFP片段之间Linker核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；优化后的EGFP蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。

3.如权利要求1所述的检测蛋白，所述检测蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.5、7、9之一所示；所述检测蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.6、8、10之一所示。

4.一种如权利要求1-3之一所述的具有绿色荧光活性的检测蛋白的构建方法，所述方法为：

根据C3片段的基因序列，从含有C3片段的菌液中PCR扩增出C3、C3DC3、C3DC3DC3序列；

通过PCR从含有EGFP序列的菌液中扩增出EGFP序列；

先将扩增出的EGFP序列经双酶切后连接到表达载体上，经鉴定后再分别将C3、C3DC3、C3DC3DC3片段连接上去，构建重组蛋白的原核表达质粒；

将所述表达载体、共表达载体转入表达宿主中培养，活化至对数生长期后加入诱导表白蛋白；

经破碎、纯化后制得融合蛋白C3-EGFP、C3DC3-EGFP、C3DC3DC3-EGFP。

5.其中，步骤（1）中使用的引物对如SEQ ID NO.1、2所示；

步骤（2）中使用的引物对如SEQ ID NO.3、4所示。

6.一种用于免疫分析的产品，所述产品包括权利要求1-3之一所述的融合蛋白。

7.如权利要求5所述的产品，所述产品的形式可为探针(传感器)、试纸条、芯片、试剂盒等，在使用时，将权利要求1所述的检测蛋白与其它现有的商业试剂(如酶标抗体、荧光标记抗体、显色剂、底物等)混合，可用于各种形式的免疫分析，例如抗体检测、抗体筛选、抗原检测、病原检测、蛋白检测、蛋白相互作用筛查、高通量靶标蛋白检测、蛋白-核酸相互作用分析、药物筛选等。