[发明专利]一种嗜热链球菌及其增殖培养方法和应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，公开了一种嗜热链球菌及其增殖培养方法和应用。所述菌株DMST‑H2分离于内蒙古家庭自制酸奶，已于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC)，保藏编号为GDMCC 60642。通过优化增殖培养基，所述菌株的活菌数可增殖至10⁹CFU/mL以上。最优条件下活菌数可达4.2×10⁹CFU/mL，是培养条件优化前的37.8倍。本发明菌株更适合中国人的肠道，且成本更低。此外，该菌株具有耐酸、耐胆盐、耐人工胃肠液的能力，同时具有突出的抗氧化能力，尤其是DPPH清除能力。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株来源于中国传统发酵乳的嗜热链球菌DMST-H2及其增殖培养方法。

背景技术

嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)是多种发酵制品的发酵剂菌种，是仅次于乳酸乳球菌的第二重要的工业乳酸菌种。人类每年消耗约10²¹嗜热链球菌活菌，致使这一菌种的市值达到了400亿美元。在乳品工业中，嗜热链球菌通常与德氏乳杆菌保加利亚亚种一起作为发酵乳直投式发酵剂的主要发酵菌株。在发酵过程中，嗜热链球菌可快速酸化培养基，抑制细菌和酵母等杂菌的生长。多数嗜热链球菌可产生并释放叶酸，而叶酸是人类饮食中不可缺少的重要组分。经过发酵，嗜热链球菌可产生多种特征风味物质，赋予发酵制品独特的感官品质，极大地影响着发酵制品的质量。

当前，我国乳品企业所用直投式发酵剂95％源于进口。进口直投式发酵剂菌株源于国外且价格昂贵，具有潜在的健康安全隐患和高价垄断弊端。有研究发现，来自本族群的原生菌或原籍菌最适合于本族人体。因此，筛选源于中国本土的发酵菌株，对外来菌株进行代替势在必行。此外，针对嗜热链球菌大量需求的现状，优化适宜菌体生长的培养基、培养条件，改善提高菌体的生长繁殖能力，是研制开发高效稳定发酵剂的基础。

李康宁等利用响应面法优化了嗜热链球菌增殖培养基，活菌数最终为2.34×10⁹CFU/mL，较优化前提高了2～3倍。但仅对培养基成分进行了优化，未涉及温度、pH、接种量等培养条件的优化，优化条件不足，且未起到很明显的优化效果。

田洪涛等通过向MRS培养基中添加不同营养物质，优化了嗜热链球菌的增殖培养基，最终活菌数可达4.69×10⁹CFU/mL，活菌数较优化前提高了40.78倍。但在MRS培养基配方的基础上直接添加玉米浆、番茄汁等营养物质，致使有效成分不明晰，不同批次的玉米浆、番茄汁等可能会对嗜热链球菌的增殖产生不同的效果，同时也增加了成本。

上述技术指出了增殖培养的优化方向，主要包括培养基组分的优化及温度、pH、接种量等培养条件的优化，但仍存在优化条件不足等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一株源于中国本土传统发酵乳的嗜热链球菌菌株DMST-H2及其增殖培养的方法，为本土来源的嗜热链球菌的研究和实际应用提供理论基础。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一株源于中国传统发酵乳——内蒙古家庭自制酸奶中分离得到的嗜热链球菌DMST-H2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC)，保藏编号为GDMCC 60642。该嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)菌株DMST-H2的生物学特征是：在MRS培养基平板上划线分离，37～48℃培养48～72h，菌落为圆形，凸起，边缘整齐，菌落乳白色，表面湿润光滑。经革兰氏染色镜检可知为革兰氏阳性菌，菌体球形，两两一对，链成长链，无芽孢(如图1所示)。生理生化试验结果表明菌株KOH试验阴性，过氧化氢酶试验阴性，兼性厌氧，能水解淀粉，不液化明胶，吲哚试验阴性。根据16S rDNA寡核苷酸序列和生理生化特性鉴定DMST-H2为嗜热链球菌。其16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。