[发明专利]一种测定25-羟基维生素D含量的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的测定25-羟基维生素D含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将样本、解离液和荧光微球工作液混合后进行孵育，得到孵育料液；

将所述孵育料液加到检测卡的加样孔中，进行层析反应，得到反应检测卡；

测定所述反应检测卡的荧光强度，根据校准曲线和反应检测卡的荧光强度，得到样本中25-羟基维生素D的含量；

其中，所述解离液包括巴比妥钠缓冲液、皂素和吐温-20；所述巴比妥钠缓冲液的pH值为7.4，浓度为200mmol/L；所述解离液中皂素的含量为1wt.%，吐温-20的含量为2wt.%；

所述荧光微球工作液中的荧光微球包括抗-25-羟基维生素D抗体标记的荧光微球和抗-鸡IgY标记的荧光微球。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光微球工作液中的稀释液包括硼酸-硼砂缓冲液、牛血清白蛋白、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述硼酸-硼砂缓冲液的pH值为8.0，浓度为50mmol/L；所述稀释液中牛血清白蛋白的含量为0.5~2wt.%，海藻糖的含量为0.5~2wt.%，聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.5~2wt.%，防腐剂的含量为0.02~0.2wt.%。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗-25-羟基维生素D抗体标记的荧光微球中，抗-25-羟基维生素D抗体的标记量为50~200μg/mL；所述抗-鸡IgY标记的荧光微球中，抗-鸡IgY的标记量为100~300μg/mL。

5.根据权利要求1~4任一项所述的方法，其特征在于，所述样本、解离液和荧光微球工作液的体积比为2：（7.5~8.5）：（2.5~3.5）。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度为室温，时间为5~15min。

7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述层析反应的温度为室温，时间为8~12min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述25-羟基维生素D包括25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3。