[发明专利]一种精氨酸中杂质的检测方法

说明书

本发明关于精氨酸杂质检测技术领域，尤其涉及一种精氨酸中杂质的检测方法。该检测方法以辛烷磺酸钠与磷酸的水溶液作为流动相A，以流动相A和乙腈按一定比例配制成混合溶液为流动相B，通过梯度洗脱来对精氨酸中的杂质进行检验，具有检测时间短、干扰小、灵敏度高的优点，能够准确测定出供试品中各杂质的含量。

技术领域

本发明关于精氨酸杂质检测技术领域，尤其涉及一种精氨酸中杂质的检测方法。

背景技术

精氨酸是组成人体蛋白质的氨基酸之一，参与组织细胞蛋白质的合成，并在尿素、肌酸、肌酐、一氧化氮、谷氨酰胺、嘧啶的合成和激素释放中发挥重要作用。精氨酸在药品应用中可以作为稳定剂、增溶剂和缓冲剂，多与头孢吡肟、培哚普利、头孢洛林酯、头孢罗膦等原料制成混粉后应用于注射剂，最大用量可达88％，因此需严格控制其质量。

目前，精氨酸已经能够进行成熟的工业化生产，可由明胶水解或以糖类物质为原料经发酵法制得。在发酵法生产精氨酸的过程中须使用糖类物质、菌种、其他氨基酸、培养基和无机盐等参与反应，产生的副产物主要有其他氨基酸(如赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、亮氨酸和异亮氨酸等)及精氨酸的降解产物(如2-亚氨基-1,3-二氮杂环庚烷-4-羧酸和3-氨基-2-哌啶酮)，均应严格控制。

现有技术中多采用薄层色谱法或者氨基酸分析仪对精氨酸中混入的其他氨基酸和杂质进行检测。薄层色谱法无法明确产品中的存在的杂质种类及杂质含量，氨基酸分析仪能够通过柱后衍生对其他氨基酸进行检测，但对于发酵降解产生的杂质不能有效的检出，且氨基酸分析仪设备昂贵，因此方法推广受限。而用现有技术中的高效液相色谱法检测精氨酸产品时存在基线波动大、色谱柱平衡时间长等问题，且2-亚氨基-1,3-二氮杂环庚烷-4-羧酸和3-氨基-2-哌啶酮以及其他氨基酸等各杂质峰之间分离效果差，无法同时检测，影响杂质检测的准确性。

发明内容

针对现有技术中基线波动大、色谱柱平衡时间长、各杂质峰之间分离效果差的问题，本发明提供一种精氨酸中杂质的检测方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种精氨酸中杂质的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱法，色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

柱温为25～40℃；

流动相：流动相A为含有9.5～10.5mmol/L辛烷磺酸钠与2.9～3.1ml/L磷酸的水溶液，流动相B为所述流动相A与乙腈体积比为29～31∶71～69的混合溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱如下：

检测波长为204～206nm。

本方法所提供的色谱条件能使色谱柱更快达到平衡，基线波动小，从而缩短检测时间，减少基线干扰，提高检测灵敏度，同时本方法还能够使精氨酸色谱峰与杂质峰完全分离，且能够使各杂质峰之间均实现良好分离，从而能够准确测定出供试品中各杂质的含量。

优选地，所述杂质包括2-亚氨基-1,3-二氮杂环庚烷-4-羧酸和3氨基-哌啶酮。

优选地，所述杂质还包括赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。以上杂质是影响精氨酸产品质量的主要杂质，定量检测有助于有效控制产品质量。该检测方法能够将2-亚氨基-1,3-二氮杂环庚烷-4-羧酸、3-氨基-2-哌啶酮以及上述各氨基酸之间均进行良好分离。

优选地，所述流动相A中辛烷磺酸钠的浓度为10mmol/L，磷酸的浓度为3ml/L。

优选地，所述流动相B为所述流动相A与乙腈体积比为30∶70的混合溶液。

优选地，所述线性梯度洗脱如下：