[发明专利]一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)样品制备：

标准品制备：以牛血清白蛋白作为空白基质，加入儿茶酚胺代谢物标准溶液，配制系列已知浓度的儿茶酚胺代谢物标准品；

质控品制备：以牛血清白蛋白作为空白基质，加入儿茶酚胺代谢物标准溶液，配制低、中、高三个已知浓度的儿茶酚胺代谢物质控样品；

(2)样品处理：样品包括待测人血浆样品、标准品、质控品，处理方法均如下：

A)预处理：取500μL样品，加入15μL内标液，涡旋混匀，再加入50mM乙酸铵溶液500μL，涡旋混匀；

B)固相萃取处理：将步骤A)中预处理样品转移入经过活化平衡的弱阳离子交换96孔板中，静置5分钟后，加入平衡淋洗液1mL，负压或正压至干；再加入1mL甲醇，负压或正压至干；最后分2次分别加入250mL洗脱液，在负压或正压下收集到96孔收集板中，用氮气吹干；

C)样品复溶：将100μL复溶液加入到步骤B)经氮气吹干后的96孔收集板中，加覆96孔板封膜，涡旋至少5分钟使残渣充分溶解，在4000rpm下离心5min后待测；

(3)样品检测：取步骤(2)处理后得到的样品10～40μL，自动进样，进行高效液相色谱串联质谱检测；

(4)数据处理及分析：建立标准曲线并计算待测人血浆样品儿茶酚胺代谢物浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述儿茶酚胺代谢物为甲氧基肾上腺素和/或甲氧基去甲肾上腺素。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素在标准品中的系列浓度为10pg/mL、20pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、150pg/mL、200pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、600pg/mL；甲氧基去甲肾上腺素中的系列浓度为20pg/mL、40pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、1200pg/mL。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素质控品低、中、高浓度分别为30pg/mL、120pg/mL、300pg/mL；甲氧基去甲肾上腺素质控品低、中、高浓度分别为60pg/mL、240pg/mL、600pg/mL。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素内标采用氘代甲氧基肾上腺素；甲氧基去甲肾上腺素内标采用氘代甲氧基去甲肾上腺素。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述经过活化平衡的弱阳离子交换96孔板的活化平衡方法为：加入1mL甲醇，静置5分钟，再加入1mL超纯水静置5分钟。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述平衡淋洗液为50mM乙酸铵溶液，pH＝7；所述洗脱液为含5％甲酸甲醇；所述复溶液为含0.1％甲酸的10％甲醇水溶液。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱条件：采用梯度洗脱反相色谱法，流动相A为0.1％甲酸-5mM甲酸铵水溶液，流动相B为0.1％甲酸甲醇溶液，色谱柱为五氟苯基柱(PFP)，流动相流速为0.6mL/min，柱温在40℃。