[发明专利]一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法

说明书

本发明公开了一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，所述方法实现了在C₁₈柱上同时快速地检测出苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸，在优化的色谱条件下，实现11min内完成分离检测，且样品质量浓度在0.25‑50mg/L范围内具有良好的线性关系，R²>0.998。该方法的检出限在0.01‑0.05mg/L之间，定量限在0.025‑0.25mg/L之间，回收率达到96.93‑118.42％，精密度为0.93％‑6.21％。所述方法具有较高的回收率和较好的精密度，完全能够满足日常发酵食品中苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的分析检测。并且该方法无需复杂的样品前处理。

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法。

背景技术

在食品生产过程中，为延长食品的保质期，往往会在加工过程中加入一些食品防腐剂。苯甲酸和山梨酸是最常用的人工合成食品防腐剂，但过多食用苯甲酸和山梨酸会影响人体对维生素和钙的吸收，加重人体肝脏负担，并引起毒症反应或诱发癌症。因此国家标准对苯甲酸、山梨酸的使用范围与限量做了严格规定。

除人工合成的食品防腐剂外，某些植物、动物、微生物本身或其代谢物中含有抗菌防腐的物质—天然防腐剂。1998年首次被发现的苯乳酸(PLA)，是一种广谱的杀菌剂、天然新型防腐剂，可以有效的防止食物腐败变质，而且对多种食源性致病菌都有很强的抑菌作用。苯乳酸可以由乳酸菌以苯丙氨酸为原料发酵产生，而苯丙氨酸作为一种常用氨基酸，广泛存在于动植物体内，故由发酵工艺生产的食品很可能含有苯乳酸。有研究者发现，苯乳酸与防腐剂联合作用，可以有效的减少食品中人工合成防腐剂的添加量。在未来天然防腐剂苯乳酸复合其他人工合成防腐剂使用可能会成为一种食品防腐的趋势。

目前，已报道的苯甲酸、山梨酸检测方法主要有色谱法和光谱法，如气相色谱法(GC)、毛细管电泳法(CE)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、液相色谱-三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)、时间飞行质谱法(LC-TOF/MS)和表面增强拉曼光谱法(SERS)等。但以上的检测方法都是针对常用防腐剂的检测，同时检测新型防腐剂——苯乳酸和其他食品防腐剂还未报道。因此建立一种快速的、同时检测苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的方法是很有必要的。

本研究旨在建立一种同时检测发酵食品中天然防腐剂苯乳酸与人工合成防腐剂苯甲酸、山梨酸简便、快捷的高效液相色谱的分析方法，并将该方法运用于多种发酵食品检测，建立发酵食品中苯乳酸的本底数据库。

发明内容

本发明目的在于建立一种同时检测发酵食品中天然防腐剂苯乳酸与人工合成防腐剂苯甲酸、山梨酸简便、快捷的高效液相色谱的分析方法。

本发明具体技术方案为：

1、一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，所述方法包括如下步骤：

1)制备混合标准溶液：分别称取苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的标准品，配制成具有浓度梯度的混合标准液；

2)制备待测样品溶液：

含有蛋白质的样品，称取2.5g样品于25mL比色管中，分别加入0.25mol/L亚铁氰化钾溶液和0.5mol/L乙酸锌溶液各1mL，用10％甲醇-水溶液定容，震荡2min，混匀，取10mL溶液4000rpm离心5min，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用；

不含蛋白质的样品：称取2.5g样品于25mL比色管中，用10％甲醇-水定容至10mL，涡旋震荡2min，混匀，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用；

3)检测仪器及检测条件：