[发明专利]一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法

权利要求书

1.一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)制备混合标准溶液：分别称取苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的标准品，配制成具有浓度梯度的混合标准液；

2)制备待测样品溶液：

含有蛋白质的样品，称取2.5g样品于25mL比色管中，分别加入0.25mol/L亚铁氰化钾溶液和0.5mol/L乙酸锌溶液各1mL，用10％甲醇-水溶液定容，震荡2min，混匀，取10mL溶液4000rpm离心5min，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用；

不含蛋白质的样品：称取2.5g样品于25mL比色管中，用10％甲醇-水定容至10mL，涡旋震荡2min，混匀，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用；

3)检测仪器及检测条件：

仪器：高效液相色谱仪；检测器：UV检测器；色谱柱：C18柱，流动相：0.02mol/L乙酸铵和甲醇按体积比80：20混合而成；流速：1mL/min；进样量：20μL；检测波长：220nm；色谱柱温度：25℃；

4)绘制标准曲线：

将步骤1)配制的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤(3)的色谱条件下进行洗脱和检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线，并评估标准曲线线性度；

5)待测样品检测:

取步骤2)中待测样品溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤3)的色谱条件下进行检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据4)中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的含量。

2.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，步骤1)所述混合标准溶液所用稀释溶剂为蒸馏水。

3.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，步骤1)所述混合标准溶液中苯乳酸、苯甲酸、山梨酸浓度分别呈2mg/L，5mg/L，10mg/L，20mg/L，30mg/L，40mg/L，50mg/L的梯度系列。

4.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，步骤3)所述C₁₈色谱柱的规格为250mm×4.6mm内径，颗粒粒径为5μm。

5.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，调节步骤3)所述流动相中0.02mol/L乙酸铵的pH为6.44，所述甲醇为含量大于99.8％的色谱纯。

6.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，通过以下方法验证检测准确度、精密度及回收率：将混合标准溶液不断稀释至信噪比S/N＝3，以此进样浓度为检出限(LOD)，以10倍信噪比对应的浓度为定量下限(LOQ)；以原生醋做加标回收实验，通过计算回收率考察方法的准确度，以回收率的相对标准偏差(RSD)考察方法的精密度，在原生醋样品中添加混合标准溶液，加标水平分别为5,10,20mg/L，每个添加水平平行测定6次，并用下面的公式计算加标回收率；

其中，Csm表示加标检测值；Cm表示样品检测值；Cs表示加标浓度。

7.根据权利要求1所述一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法，其特征在于，本方法苯甲酸线性范围为0.01-50mg/L，苯乳酸为0.075-50mg/L，山梨酸为0.05-50mg/L，且线性相关性均大于0.998，检出限在0.01至0.05mg/L之间，定量限在0.025至0.25mg/L之间。