[发明专利]一种提高罗汉果种苗脱毒效率的方法

说明书

一种提高罗汉果种苗脱毒效率的方法，所述的方法包括：步骤一，配制含病毒抑制剂罗汉果种苗快繁培养基；步骤二，将罗汉果种苗转入步骤一所述的培养基中25～30℃继代培养；步骤三，将步骤二的罗汉果种苗于35～39℃培养，切取种苗的茎尖；步骤四，将步骤三的罗汉果种苗茎尖接种到常规快繁培养基培养30～45天，获得脱毒罗汉果植株；其中，所述病毒抑制剂培养基至少包含以下的一种：病毒唑10～60ppm，吗啉胍100～500ppm，达菲20～100ppm。本发明联合使用病毒抑制剂、茎尖脱毒法，对罗汉果种苗进行二次脱毒，显著提高了罗汉果种苗的脱毒效率。同时，本发明脱毒培养方法简单、简化了操作程序，生产成本低，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及罗汉果植物繁殖领域，特别涉及一种提高罗汉果种苗脱毒效率的方法。

背景技术

罗汉果为葫芦科罗汉果属植物的成熟果实，主产于广西永福、临桂和龙胜等县，其性凉味甘，无毒，有润肺止咳、凉血、润肠通便的功效，是我国传统出口商品之一，在港澳地区、东南亚和欧美国家颇受欢迎。近年来，广西罗汉果产业发展迅猛，罗汉果种植面积不断扩大，越来越多的企业加入到罗汉果组培苗产业化生产的行列，组培苗规格统一，可供种苗数量大，技术上可以脱毒，但由于种种原因，广西罗汉果主产区均普遍发生病毒病，严重地块发病率达100％，受害植株减产25％～45％，严重的达50％以上，导致罗汉果品质下降，次果增加，造成了巨大的经济损失。当前对罗汉果危害最大的是花叶病毒，脱毒培养罗汉果种苗是去除花叶病的一种有效措施。

目前罗汉果脱毒方法主要有两个：1)常规的茎尖培养法：以罗汉果组培苗为试材，在高温热处理不同天数后剥取茎尖，进行罗汉果花叶病毒脱毒。2)使用脱毒培养基进行脱毒，如：

中国专利CN106718922A公开了一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法，包括：将外植体进行消毒得到无菌外植体；将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中进行诱导培养得到无菌试管苗；将所得无菌试管苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试管苗；将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基中进行脱毒培养得到试管丛生芽；选取健壮的试管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培养得到带根植株，最后将所得的带根植株进行练苗和移栽；其中，所述MS诱导培养基至少包含0.5～1.0mg/L的金刚烷酮，所述MS预培养基至少包含0.5～1.0mg/L的金刚烷酮和0.1～0.6mg/L的硝酸银，所述脱毒培养基包含：0.2～1.0mg/L的TDZ 0.1～0.5mg/L的ZT 0.1～1.0mg/L的IBA 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，pH值为5.5～6。

但上述脱毒方法存在有一定缺陷，无论是常规的茎尖培养法还是使用脱毒培养基进行脱毒，都只是进行了一次性脱毒，脱毒效率得不到保证；同时其技术性强，脱毒培养方法繁琐、生产成本高，不适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术之不足，提供一种提高罗汉果种苗脱毒效率的方法，显著提高带病毒罗汉果植株的脱毒效率，降低工业化生产成本。

本发明的目的是通过下述方案来实现的：

本发明提供一种提高罗汉果种苗脱毒效率的方法，所述的方法包括：步骤一，配制含病毒抑制剂罗汉果种苗快繁培养基；步骤二，将罗汉果种苗转入步骤一所述的培养基中25～30℃培养；步骤三，将步骤二的罗汉果种苗于35～39℃培养，切取种苗的茎尖；步骤四，将步骤三的罗汉果种苗茎尖接种到常规快繁培养基培养30～45天，获得脱毒罗汉果植株；其中，所述病毒抑制剂培养基至少包含以下的一种：病毒唑10～60ppm，吗啉胍100～500ppm，达菲20～100ppm；

优选地，所述步骤二中每次继代培养的天数为10～30天；

优选地，所述步骤三中培养的天数为5～15天；

优选地，所述步骤三中培养的温度为38～39℃；

优选地，所述步骤三中茎尖为0.2～0.5mm；