[发明专利]一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法

说明书

本发明公开了一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，包括以下步骤：S1、采用密孔菌Pycnoporus sp.SYBC‑L10发酵产漆酶；S2、首先将含有四环类抗生素或磺胺类抗生素的废液pH调至3.0‑6.0，然后加入S1中得到的漆酶，同时加入小分子介体ABTS或者丁香醛，静置孵育一段时间即可。本发提供了一个可以高效降解环境中四环类和磺胺类抗生素的漆酶及方法，比已报道的类似漆酶效果明显快(降解50mg L^‑1抗生素通常只需要5‑10min)，与传统的物理化学法相比，绿色安全，环境友好，符合可持续发展需求，在未来治理环境中的抗生素应用中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及酶工程与技术和发酵技术领域，尤其涉及一株密孔菌发酵产漆酶用于高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法

背景技术

残留在环境中的抗生素(Antibiotics)，被认为是一类新兴污染物，给人类的健康和生态系统的稳定造成了极大的风险。近年来，如何去除残留在环境中的抗生素引起了人们的广泛关注。抗生素在医药、水产养殖等行业中广泛地应用，目前已经是世界上用量最大、使用最广泛的药物之一。近年来，漆酶在抗生素的降解中扮演了重要的角色。然而，现有的研究反应时间需要几个小时甚至几天以上，而且国内用于抗生素降解的漆酶主要用的都是进口的商品化漆酶，价格昂贵，降解效果并不理想，很难实现规模化应用，并且我们很难得到自主的知识产权。为了解决这一问题，我们除了对现有菌株进行基因改造、菌种改良等策略外，筛选新型的漆酶菌株、对天然漆酶进行性质及应用研究依然具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服目前全世界暂时都没有找到合适的可高效降解四环类和磺胺类抗生素的酶缺陷，提供一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，包括以下步骤：

S1、采用密孔菌Pycnoporus sp.SYBC-L10发酵产漆酶；

S2、首先将含有四环类抗生素或磺胺类抗生素的废液pH调至3.0-6.0，然后加入S1中得到的漆酶，同时加入小分子介体ABTS或者丁香醛，静置孵育一段时间即可。

S1中漆酶生产制备工艺可采用如下步骤：

(1)菌的活化：将所述密孔菌Pycnoporus sp.SYBC-L10划线接种于PDA斜面培养基，30℃培养3-4d；PDA培养基组成：土豆200g L^-1,葡萄糖20g L^-1，琼脂粉20g L^-1，pH自然；

(2)产孢子：将步骤(1)所述斜面培养基上生长的菌种转接至PDA平板30℃培养7d，待菌丝长满整个平板，PDA培养基组成同步骤(1)，pH自然；

(3)种子培养：用1mL移液枪分10次吸取10mL无菌水从步骤(2)所述平板上将孢子冲洗下来，在装有玻璃珠的250mL三角瓶中摇匀(三角瓶装玻璃珠后纱布牛皮纸包好灭菌后使用)，取1mL接种至种子培养基(即PDB培养基)30℃，200r min^-1条件下培养2天；PDB培养基组成：土豆200g L^-1,葡萄糖20g L^-1，pH自然；