[发明专利]一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法

权利要求书

1.一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、采用密孔菌Pycnoporus sp.SYBC-L10发酵产漆酶；

S2、首先将含有四环类抗生素或磺胺类抗生素的废液pH调至3.0-6.0，然后加入S1中得到的漆酶，同时加入小分子介体ABTS或者丁香醛，静置孵育一段时间即可。

2.如权利要求1所述的漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，其特征在于，在S2前先将S1中得到的漆酶进行纯化。

3.如权利要求2所述的漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，其特征在于，纯化的方法包括以下步骤：

S1、先将发酵液先用定性滤纸抽滤除去大部分菌体，然后离心得到上清液即为粗酶液；

S2、向粗酶液缓慢加入35％～45％硫酸铵，搅拌溶解，4℃冰箱过夜，第二天离心去除沉淀，收集上清液得到除去部分杂蛋白的粗酶液，然后继续缓慢加入硫酸铵达到体积分数为65～75％，搅拌溶解，4℃冰箱过夜，第二天离心，倒掉上清液，用少量体积的柠檬酸盐缓冲液溶解沉淀得到浓缩粗酶液，透析袋过夜脱盐或脱盐柱脱盐，用于漆酶的进一步纯化；

S3、离子交换层析：采用Hi Trap Q HP(1.6cm×30cm,5mL,GE Healthcare,LittleChalfont,UK)阴离子交换色谱柱对所得浓缩粗酶液进行漆酶的分离纯化；

S4、将所得纯酶加入部分甘油，-80℃冰箱保存备用。

4.如权利要求3所述的漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，其特征在于，离子交换层析上样之前先用柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0,20mmol L^-1)平衡好柱子，每次的上样量为15mL样品，然后用0–1mol L^-1NaCl柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0,20mmol L^-1)线性梯度洗脱，流速为5mL min^-1，收集洗脱液，每管1.5mL，透析袋过夜脱盐或脱盐柱脱盐。

5.如权利要求1所述的漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，其特征在于，S1中产漆酶的发酵培养基为葡萄糖15g L^-1，豆粕5g L^-1，柠檬酸氢二铵0.5g L^-1，CuSO₄·5H₂O0.125g L^-1，KCl 0.5g L^-1，KH₂PO₄ 1g L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.5g L^-1，酵母膏1g L^-1，MnSO4·H₂O0.01g L^-1，初始pH为4.0。