[发明专利]一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组、试剂盒及方法，属于生物技术领域。本发明提供的检测方法包括以下步骤：首先，利用核酸提取试剂提取待测样品的DNA，得到DNA提取液；接着，将DNA提取液、复溶液、甜菜碱和引物组进行混合，得到反应液；然后，将反应液进行PCR扩增反应，便可根据PCR扩增反应结果判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。其中，该引物组包括上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环状引物和下游环状引物。另外，本发明提供的LAMP引物组具有良好的特异性，使用该引物组可以快速有效地检测出痰液中的铜绿假单胞菌，而且操作简单、方便。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

铜绿假单胞菌是一种条件致病菌，是呼吸道感染的常见细菌，其分布十分广泛，在免疫功能受损的病人中能够引起严重感染。

环介导等温扩增法(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种新的核酸扩增技术，其具有检测周期短、灵敏度高、设备简单以及产物检测便捷等优点。然而，由于现有LAMP引物组的特异性较差，目前主要是通过LAMP技术来检测食品中的铜绿假单胞菌，其不易对痰液等其他样品中的铜绿假单胞菌进行检测，因此存在着一定的局限性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组、试剂盒及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组，包括上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环状引物和下游环状引物；

所述上游外部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示：CGGSGCWGTCSAGAAC；

所述下游外部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示：TGSCGGAAAWGCCGWAAG；

所述上游内部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示：ACCSTCGATACGSTTTCCCGTWGTGAGGWGTSCGWGTGGTT；

所述下游内部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示：TCSAATCCCTCSCTCACCGSGGTGCSGAAATGWAAAWGGC；

所述上游环状引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示：TCSAGSCGTGCWCCTTC；

所述下游环状引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示：AWGGCCSGGCTWATCWAGTT；

其中，上述核苷酸序列中的W代表A或T，S代表G或C。

本发明实施例还提供了一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其包括核酸提取试剂、复溶液、甜菜碱以及引物组混合物，所述的引物组混合物包括上述引物组中的各个引物。

本发明实施例提供的另一种优选方案，所述的引物组混合物包括以下按照体积份计的组分：上游外部引物4-6份、下游外部引物4-6份、上游内部引物3-5份、下游内部引物3-5份、上游环状引物18-22份、下游环状引物18-22份。

本发明实施例提供的另一种优选方案，所述的引物组中，上游外部引物和下游外部引物的摩尔浓度均为4-6pmol/μL。

本发明实施例提供的另一种优选方案，所述的引物组中，上游内部引物和下游内部引物的摩尔浓度均为30-50pmol/μL。

本发明实施例提供的另一种优选方案，所述的引物组中，上游环状引物和下游环状引物的摩尔浓度均为10-30pmol/μL。