[发明专利]一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910756956.7 | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110295243A | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 刘静姿;齐财;黄培;周庭波;韩克兵;王磊 | 申请（专利权）人： | 贵州金玖生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/385 |
| 代理公司： | 北京艾皮专利代理有限公司 11777 | 代理人： | 李德胜 |
| 地址： | 550002 贵州省贵阳*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物组 铜绿假单胞菌 检测 待测样品 环状引物 外部引物 试剂盒 核酸提取试剂 上游内部引物 生物技术领域 下游内部引物 反应结果 上游 复溶液 甜菜碱 有效地 痰液 | ||
1.一种用于检测铜绿假单胞菌的引物组，其特征在于，所述的引物组包括上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环状引物和下游环状引物；所述上游外部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示，所述上游内部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:3所示，所述下游内部引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:4所示，所述上游环状引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:5所示，所述下游环状引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:6所示。
2.一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，包括核酸提取试剂、复溶液和甜菜碱，其特征在于，所述的试剂盒还包括引物组混合物，所述的引物组混合物包括如权利要求1所述的引物组。
3.根据权利要求2所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的引物组混合物包括以下按照体积份计的组分：上游外部引物4-6份、下游外部引物4-6份、上游内部引物3-5份、下游内部引物3-5份、上游环状引物18-22份、下游环状引物18-22份。
4.根据权利要求3所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的引物组中，上游外部引物和下游外部引物的摩尔浓度均为4-6pmol/μL。
5.根据权利要求3所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的引物组中，上游内部引物和下游内部引物的摩尔浓度均为30-50pmol/μL。
6.根据权利要求3所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的引物组中，上游环状引物和下游环状引物的摩尔浓度均为10-30pmol/μL。
7.根据权利要求2所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述甜菜碱的摩尔浓度为4-6mol/L。
8.一种用于检测铜绿假单胞菌的方法，其特征在于，所述的方法是采用如权利要求2-6中任一项所述的试剂盒进行检测，其包括以下步骤：
利用核酸提取试剂提取待测样品的DNA，得到DNA提取液；
将DNA提取液、复溶液、甜菜碱和引物组混合物进行混合，得到反应液；
将反应液进行PCR扩增反应，根据PCR扩增反应结果判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。
9.根据权利要求8所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中，PCR扩增反应的温度为60-65℃。
10.根据权利要求9所述的一种用于检测铜绿假单胞菌的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中，根据PCR扩增反应结果的CT值判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌；若CT值不大于55，则待测样品中含有铜绿假单胞菌；若CT值大于55，则待测样品中不含有铜绿假单胞菌。
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