[发明专利]一种玉米赤霉烯酮-呕吐毒素双通道免疫定量试纸条在审

申请号：	201910748957.7	申请日：	2019-08-14
公开（公告）号：	CN110488016A	公开（公告）日：	2019-11-22
发明（设计）人：	孙秀兰;李淼;王海鸣;刘莹;纪剑;张银志;孙嘉笛;皮付伟	申请（专利权）人：	江南大学
主分类号：	G01N33/58	分类号：	G01N33/58;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/533
代理公司：	23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司	代理人：	林娟<国际申请>=<国际公布>=<进入国
地址：	214000 江苏***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	玉米赤霉烯酮荧光微球检测线呕吐毒素人工抗原荧光探针试纸条制备呕吐毒素单克隆抗体免疫层析试纸条荧光免疫分析仪快速检测技术硝酸纤维素膜读取单克隆抗体竞争免疫法羊抗鼠二抗羊抗兔二抗定量分析质控线C线标记荧光免疫定量免疫分析胶体金灵敏度喷涂于双通道微球荧光保存
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【权利要求书】：

1.一种玉米赤霉烯酮-呕吐毒素双通道免疫定量试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上利用玉米赤霉烯酮人工抗原、呕吐毒素人工抗原和羊抗鼠二抗分别作为检测线T1线、检测线T2线和质控线C线，其中玉米赤霉烯酮人工抗原的用量为0.2-1.6μg/cm，呕吐毒素人工抗原的的用量为0.1-1.2μg/cm。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T1线、检测线T2线和质控线C线三线之间各自相距0.3-0.5cm。

3.根据权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述吸水纸、硝酸纤维素膜以及样品垫依次相邻，且相邻部位部分重叠区域的长度为2-4mm。

4.权利要求1-3任一所述试纸条在检测玉米赤霉烯酮和呕吐毒素中的应用。

5.一种双通道检测玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将经荧光微球标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体Eu-ZEN-mAb和呕吐毒素单克隆抗体Eu-DON-mAb与玉米赤霉烯酮-呕吐毒素的混标样品混匀，加入到权利要求1-3任一所述试纸条中的样品垫上，进行层析，然后利用免疫定量分析仪分别测定混标样品相应的荧光强度值：T1值、T2值和C值；

(2)设置阴性对照，即混标样品中不含有玉米赤霉烯酮和呕吐毒素，利用免疫定量分析仪测得荧光强度T₀值；

(3)分别取T1/T₀、T2/T₀作为参数，与浓度的对数值建立线性模型，得到玉米赤霉烯酮和呕吐毒素相应的标准曲线；

(4)参照步骤(1)层析待测样品，得到相应的荧光强度值，分别利用步骤(3)所得的两种毒素的标准曲线，即得毒素含量结果。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的层析时间为10-15min。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述混标样品的介质是含10％-40％甲醇的PBS溶液。

8.根据权利要求5-7任一所述的方法，其特征在于，所述抗体复合物溶液是含有1％BSA、0.05％吐温-20的PBS溶液；其中荧光探针的浓度为0.25-5μg/μg。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的层析时间为10min。