[发明专利]一种玉米赤霉烯酮-呕吐毒素双通道免疫定量试纸条

说明书

本发明公开了一种玉米赤霉烯酮‑呕吐毒素双通道免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。本发明通过标记荧光微球制备荧光探针，包括荧光微球‑玉米赤霉烯酮单克隆抗体、荧光微球‑呕吐毒素单克隆抗体和荧光微球‑羊抗兔二抗，将玉米赤霉烯酮人工抗原、荧光微球人工抗原和羊抗鼠二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线T1线、检测线T2线和质控线C线制得免疫层析试纸条；利用竞争免疫法，通过读取荧光免疫分析仪上检测线的荧光值，对样品中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素同时进行定量分析。该方法不但克服了试纸条技术中胶体金不易保存的缺点，而且制备荧光探针的方法简单高效、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种玉米赤霉烯酮-呕吐毒素双通道免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。

背景技术

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌及串珠镰刀菌等产生的一种雌激素类真菌毒素，广泛存在于玉米、小麦、高粱等谷物及其制品中，具有很强的生殖发育毒性和致畸作用，可导致家禽和牲畜的生长缓慢和免疫抑制等，并能够通过食物链进入人体，产生血液和免疫毒性，并且具有致癌活性可导致肿瘤，对人类健康带来巨大危害。

呕吐毒素，学名脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，是单端孢菌素烯烃中的一种。其作为一种常见的真菌毒素，主要污染物有小麦、大麦、燕麦、玉米等谷物作物。

谷物及其制品在生产过程中可能受到多种产毒真菌毒素的污染，或者感染的真菌能同时产生多种毒素，因此会含有不止一种或者一类真菌毒素。目前同时检测真菌毒素的方法主要是HPLC-MS，但是由于其需要昂贵的设备，复杂的样品前处理等要求，不适合用于快速检测谷物中的真菌毒素，因此亟需开发能够在短时间内同时检测多种真菌毒素的检测方法。目前检测呕吐毒素的试纸条虽有报道，如申请号为201720645327.3、201710319370.5的快速检测卡、201720357308.0的荧光免疫层析试剂盒、201620051794.9的胶体金检测卡，此外，检测玉米赤霉烯酮的试纸条也有报道，如申请号为201720453761.1、20210307321.7的荧光定量快速检测试纸条，但缺少同时检测呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的免疫定量试纸条，因此本专利以时间分辨荧光微球为示踪物，根据免疫竞争反应模式建立了一种可以同时检测谷物中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的双通道免疫层析分析法。

每年全球粮食总产量的25％受到真菌毒素的污染。所有的农作物在生长、采后贮藏以及加工时期，都可能会被污染产毒真菌进而含有生物毒素，亟需研究出更加灵敏，更加方便的可用于现场快速、高通量、多通道检测的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明提供了一种基于荧光微球标记的同时快速检测玉米赤霉烯酮-呕吐毒素的免疫定量试纸条。本发明采用荧光微球替代胶体金，分别用荧光微球标记玉米赤霉烯酮抗体复合物和呕吐毒素抗体复合物，利用竞争免疫法，将其作为荧光探针用于免疫层析，通过读取荧光免疫分析仪上检测线的荧光值，对样品中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素同时进行定量分析，可以快速定量检测玉米赤霉烯酮和呕吐毒素。

本发明第一个目的是提供一种玉米赤霉烯酮-呕吐毒素免疫定量试纸条，所述试纸条包括样品垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上利用玉米赤霉烯酮人工抗原、呕吐毒素人工抗原和羊抗鼠二抗分别作为检测线T1线、检测线T2线和质控线C线，其中玉米赤霉烯酮人工抗原的用量为0.2-1.6μg/cm，呕吐毒素人工抗原的的用量为0.1-1.2μg/cm。

在本发明的一种实施方式中，所述检测线T1线、检测线T2线和质控线C线三线之间各自相距0.3-0.5cm。

在本发明的一种实施方式中，所述NC膜为0.3-1cm左右的宽度切条。优选0.4cm。

在本发明的一种实施方式中，所述检测线T1线是将0.2-0.8mg/mL玉米赤霉烯酮人工抗原喷涂到NC膜上，每cm的NC膜宽度喷涂量为1-2μL。当NC膜宽度为0.4cm是，喷涂量为0.4-0.8μL。