[发明专利]一种人五聚素3磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及一种人五聚素3(PTX3)磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。所述试剂盒包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的人五聚素3单克隆抗体，生物素标记的人五聚素3单克隆抗体，人五聚素3校准品。本发明的试剂盒与目前市场上已有的ELISA试剂盒相比，检测范围宽，具有更好的重复性和灵敏度。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测人血清或血浆中人五聚素3 (PTX3)含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。所述试剂盒包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的人五聚素3单克隆抗体，生物素标记的人五聚素3单克隆抗体，人五聚素3校准品。本发明的试剂盒与目前市场上已有的ELISA试剂盒相比，检测范围宽，具有更好的重复性和灵敏度。

背景技术

人五聚素3(Pentraxin3，PTX3)属正五聚蛋白家族成员，又称肿瘤坏死因子刺激基因14(TSG14)，是一种典型的急性期蛋白。PTX3作为唯一的可溶性模式识别受体，可以结合多种可溶性受体配体，参与免疫防御、炎症、细胞凋亡、血管重塑、女性生殖及动脉粥样硬化等多种生物效应。新近研究显示，与C反应蛋白(CRP)相比，PTX3更能迅速反应组织局部的炎症及损伤，有望成为临床更为敏感的血清学标志而备受重视。

正五聚蛋白包括长链家族及短链家族成员。PTX3是最早发现的长链正五聚蛋白，含高度保守的381个氨基酸长链，包括17个信号位肽，其中N末端区域 203个氨基酸与短链家族成员CRP同源，与血清淀粉样蛋白P成分同源的是C末端178个氨基酸肽链区域，分子量约为40KD，其肽链在N末端部分比血清淀粉样蛋白P成分和CRP的要长。

PTX3是一种多功能蛋白，在许多疾病中发挥不同的作用。在自身免疫性疾病和炎症中，如类风湿关节炎和血管炎患者血清中的水平与其疾病的活动性和治疗的反应性相关。PTX3可能成为一种不同于CRP的检测意义的新的生物学标志物，用于临床诊断，评定疾病活动性和严重性，监测治疗效果，预测心血管并发症的发生和风险性评估等多个方面。近年文献报道：在某些自身免疫性疾病及炎症性损伤模型中，PTX3发挥了保护性效应，限制损伤的发生发展。

目前临床缺乏人五聚素3的快速诊断试剂盒。已有的基础和临床研究均是利用生物科技公司提供的专用于科研的试剂盒检测(不能用于临床诊断)。这些试剂盒多是采用酶联免疫吸附技术，检测时间相对较长(从标本提取到酶标仪读取吸光度值，再到定量计算需要5-8h)，且成本高昂。理想的反映器官功能的标记物应兼顾敏感性和特异性，具有准确、简便、价廉、无创等特点。因此，采用现代科学技术，开发联合指标集内各个指标的临床诊断试剂盒，具有重大的临床意义及经济意义，且具有原始创新性。

本专利发明的PTX3试剂盒以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光免疫分析方法与化学发光类测定仪配合，用于测定人体血清/血浆中的人五聚素 3含量，该试剂盒与目前专用于科研的ELISA试剂盒相比，价格低廉，灵敏度高，重复性好，速度快。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种人五聚素3的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了酶联免疫试剂盒存在的线性范围窄、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低、稳定性差、成本高等缺陷。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种制备工艺简单、成本低廉、灵敏度高的人五聚素3化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的人五聚素3抗体，生物素标记的人五聚素3抗体，人五聚素3抗体校准品。

优选的，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁性纳米材料，粒径为10～30nm，悬浮于磁微粒包被物缓冲液中，浓度为 0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的浓度为0.5mg/mL；磁微粒包被物缓冲液为20mM～ 200mM Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为 100mM，优选的PH为7.0。