[发明专利]一种提升耐热纤维素酶酶活力和热稳定性的方法

权利要求书

1.一种酶活力和热稳定性提高的耐热纤维素酶突变体，其特征在于，所述耐热纤维素酶突变体是对嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)中糖苷水解酶第45家族的耐热纤维素内切酶CTendo45进行定点突变获得的酶突变体，其中突变位点为第90位的Thr和第173位的Tyr，所述第90位的Thr突变为Ala，所述第173位的Tyr突变为Phe；

所述耐热纤维素酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的耐热纤维素酶突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用定点突变试剂盒引入目的突变氨基酸位点，扩增得到两端带有EcoRI和NotI酶切位点的突变酶扩增产物，将突变酶扩增产物连接至已双酶切的酵母表达载体pPIC9K上，获得携带目的基因的酵母表达载体；

(2)将携带目的基因的酵母表达载体进行线性化和去磷酸化处理，然后转化酵母感受态细胞，获得酵母工程菌；选择线性化限制性内切酶SacI和去磷酸化酶AP进行线性化和去磷酸化处理；

(3)将酵母工程菌进行诱导培养，培养液离心，收集上清粗酶液；将上清粗酶液进行沉淀、透析和分离纯化，获得耐热纤维素酶突变体；诱导培养的方法为：将活化后的酵母工程菌接种于BMGY培养基中，28℃振荡培养22-24h，离心后将菌液转移至BMMY培养基中开始诱导表达，每12h添加1mL甲醇，连续6-8d。

3.权利要求1所述的耐热纤维素酶突变体在饲料加工、食品行业、酿造业、制酒工业、新能源领域、造纸行业和纺织业中的应用。