[发明专利]一种猪旋毛虫病上转发光诊断试剂盒

权利要求书

1.一种猪旋毛虫病上转发光诊断试剂盒，其特征在于，包括下列步骤：

（一）、颗粒硅化及其羧基修饰；

（二）、旋毛虫重组WM5 RTWM5制备，其基因序列如SEQ ID No.1所示；

（三）、试剂盒的制备，包括：

样品垫：玻璃纤维素膜，厚度0.70mm；

结合垫：玻璃纤维素膜，厚度0.25mm；

分析膜：硝酸纤维素膜，平均孔径5μm；

吸水垫：纤维素膜，厚度1.10 mm；

粘性底衬：附有压力敏感胶的聚氯乙烯板，厚度0.25mm；

检测试纸条组装塑料外壳；

猪旋毛虫病上转发光检测检测带和质控带喷膜浓度：

在检测带T固定旋毛虫表达抗原旋毛虫重组WM5，在质控带C固定兔抗山羊IgG，将硅化及其羧基修饰的上转发光纳米颗粒UCP-NPs，用常规标记缓冲液重悬至浓度为1mg/mL，用结合物稀释液稀释至0.5mg/mL，加入山羊抗猪IgG，持续搅拌1h；加入BSA，反应10min；4℃12000rpm离心30min，弃上清，即为UCP-NPs-山羊抗猪IgG，用结合物稀释液将离心备用的结合物重悬至终浓度0.5mg/mL，将其浇于1.0×12.5 cm的结合垫，并烘干；其中：

旋毛虫重组WM5用量12 mg，使用浓度2mg/ml；

山羊抗猪IgG用量10 mg，使用浓度50μg/ml；

兔抗山羊IgG用量5 mg，使用浓度0.5 mg/ml；

上转发光纳米颗粒UCP-NPs用量100 mg，使用浓度0.33 mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种猪旋毛虫病上转发光诊断试剂盒，其特征在于：步骤（一）颗粒硅化及其羧基修饰如下：

(1) 称取50mg的上转发光纳米颗粒UCP-NPs溶于16.7mL的异丙醇中；

(2) 待样品均匀分散后，用超声仪对样品超声2min；

(3) 42℃搅拌30min；

(4)缓缓加入84μL的四乙基原硅酸盐，继续搅拌1h；

(5) 12000rpm/min，离心5min，用异丙醇清洗2次；

(6)加16.7mL异丙醇将清洗后的上转发光纳米颗粒UCP-NPs重悬并超声30s；

(7) 42℃搅拌30min；

(8)加16.7mL的单羧酸硅烷偶联剂，42℃搅拌3h；

(9)将反应体系全部蒸干；

(10) 12000rpm/min，离心5min，用去离子水清洗2次；

(11) -20℃冻存。