[发明专利]一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法

说明书

本发明涉及hs‑cTnI测定技术领域，尤其涉及一种量子点荧光免疫法测定全血hs‑cTnI的方法，解决现有技术中存在的普通的荧光标记物不易标记、稳定性差的缺点，包括以下步骤：S1、制备量子点标记蛋白液；S2、制备量子点标记蛋白检测液；S3、制备包被有检测指标的反应膜；S4、制备量子点荧光免疫层析试纸条；S5、取得待测样本；S6、将试纸卡置入荧光定量分析仪分析。本发明中量子点灵敏度高，光稳定好，在环境条件下没有任何聚集或沉淀，其灵敏度相比传统检测方式高，其测定结果与罗氏的相关性好，所需时间较短，检测方便，可以很好的满足临床需求。

技术领域

本发明涉及hs-cTnI测定技术领域，尤其涉及一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法。

背景技术

心肌损伤标志物是急性心血管疾病早期诊断的重要依据，cTn是目前用于诊断评估急性心血管疾病的首选生化标志物。hs-cTn敏感性高于常规肌钙蛋白，可以检测到微小心肌损伤，利于心肌梗死的早期诊断。心肌损伤标志物的快速检测对筛查AMI来说十分重要，传统的检测cTn的POCT法一般使用基于胶体金颗粒标记的免疫层析的检测方法，具有使用简便、快速的特点，但其灵敏度不高、不能准确定量，基于荧光标记的免疫层析法可以很大程度上提高检测灵敏度，但普通的荧光标记物不易标记，稳定性较差。

因此，我们提出了一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法用于解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的普通的荧光标记物不易标记、稳定性差的缺点，而提出的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法。

一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，包括以下步骤：

S1、制备量子点标记蛋白液：取浓度为1μM～10μM的0.2～2nmol的CdTe/CdSe/ZnS水溶性量子点平衡至室温，超声波处理；将量子点、EDC、NHS、蛋白分别用20mM～200mM、pH为6.5～7.2的磷酸盐溶液溶解，按照0.8μmol～3μmol EDC/2nmol量子点的比例加入EDC，按照0.8μmol～3μmol NHS/2nmol量子点的比例加入NHS，再按20nmol～50nmol蛋白/1nmol量子点的比例加入浓度为5～8mg/mL的蛋白，室温下磁力搅拌反应1～4小时，反应结束后用离心超滤管超滤浓缩至35～120μL，然后用凝胶渗透色谱法进行纯化，收集荧光部分，再用离心超滤器浓缩至量子点浓度为0.2～2μmol/L，将其保存于蛋白液缓冲液中，1～12℃保存备用；

S2、制备量子点标记蛋白检测液：将S1所述量子点标记蛋白液取出放置至室温，用抗体稀释液稀释200～900倍，得量子点标记蛋白检测液，2～12℃保存备用；

S3、制备包被有检测指标的反应膜：将NC膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将hs-cTnI抗体用包被缓冲液调节浓度至0.1～5mg/mL，按照0.8～1.2uL/cm的膜液量，将hs-cTnI抗体喷涂到反应膜上对应的检测区和控制区上进行包被，放置32～42℃烘箱处理1～3小时，置于恒温恒湿保藏箱里备用；

S4、在上述PVC背衬上依次粘贴样品垫、步骤S3制得的反应膜以及吸水垫，得到试纸板，将试纸板切割成试纸条，将试纸条装载于试纸卡内，得量子点荧光免疫层析试纸条；

S5、用抗凝真空采血管收集患者的静脉血2ml，采血后颠倒混匀5～8次，得待测样本；

S6、取300uL～500μL量子点标记蛋白检测液与20μL～100μL待检测样本充分混匀后，取60μL～80μL混合液滴加到试纸卡上的加样孔内，静置3～10min，将试纸卡置入荧光定量分析仪，测得hs-cTnI含量。

优选的，步骤S1所用的蛋白为牛血清白蛋白。

优选的，步骤S1所用的离心超滤管的截留分子量为25kDa～95kDa。