[发明专利]一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法

权利要求书

1.一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备量子点标记蛋白液：取浓度为1μM～10μM的0.2～2nmol的CdTe/CdSe/ZnS水溶性量子点平衡至室温，超声波处理；将量子点、EDC、NHS、蛋白分别用20mM～200mM、pH为6.5～7.2的磷酸盐溶液溶解，按照0.8μmol～3μmol EDC/2nmol量子点的比例加入EDC，按照0.8μmol～3μmol NHS/2nmol量子点的比例加入NHS，再按20nmol～50nmol蛋白/1nmol量子点的比例加入浓度为5～8mg/mL的蛋白，室温下磁力搅拌反应1～4小时，反应结束后用离心超滤管超滤浓缩至35～120μL，然后用凝胶渗透色谱法进行纯化，收集荧光部分，再用离心超滤器浓缩至量子点浓度为0.2～2μmol/L，将其保存于蛋白液缓冲液中，1～12℃保存备用；

S2、制备量子点标记蛋白检测液：将S1所述量子点标记蛋白液取出放置至室温，用抗体稀释液稀释200～900倍，得量子点标记蛋白检测液，2～12℃保存备用；

S3、制备包被有检测指标的反应膜：将NC膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将hs-cTnI抗体用包被缓冲液调节浓度至0.1～5mg/mL，按照0.8～1.2uL/cm的膜液量，将hs-cTnI抗体喷涂到反应膜上对应的检测区和控制区上进行包被，放置32～42℃烘箱处理1～3小时，置于恒温恒湿保藏箱里备用；

S4、在上述PVC背衬上依次粘贴样品垫、步骤S3制得的反应膜以及吸水垫，得到试纸板，将试纸板切割成试纸条，将试纸条装载于试纸卡内，得量子点荧光免疫层析试纸条；

S5、用抗凝真空采血管收集患者的静脉血2ml，采血后颠倒混匀5～8次，得待测样本；

S6、取300uL～500μL量子点标记蛋白检测液与20μL～100μL待检测样本充分混匀后，取60μL～80μL混合液滴加到试纸卡上的加样孔内，静置3～10min，将试纸卡置入荧光定量分析仪，测得hs-cTnI含量。

2.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，步骤S1所用的蛋白为牛血清白蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，步骤S1所用的离心超滤管的截留分子量为25kDa～95kDa。

4.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，所述蛋白液缓冲液为含有10～120mM Na₂HPO₄、10～120mM KH₂PO₄、65～250mM NaCl、35～150mM KCl、质量分数0.05％NaN₃的水溶液，且其pH为7.50～8.80。

5.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，所述抗体稀释液为含有10～150mM 2-(N-吗啉)乙磺酸、质量分数0.01～0.2％(v/v)ProClin300、质量分数0.05％～0.2％(v/v)Tween-20的水溶液，且其pH为6.10～8.20。

6.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，所述包被缓冲液为含有20mM～150mM NaCl、质量分数0.15％～3.5％PEG 20000、质量分数0.2％～1％海藻糖、2mg/mL～10m/mL牛血清白蛋白、质量分数0.05％NaN₃的10mM～100mM磷酸盐溶液。

7.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于，所述反应膜上检测区和控制区之间的间隔为4～11mm。

8.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于,所述抗凝真空采血管为肝素锂抗凝真空采血管或EDTA-K2抗凝真空采血管。

9.根据权利要求1所述的一种量子点荧光免疫法测定全血hs-cTnI的方法，其特征在于,室温低于25℃时，抗凝真空采血管放入37℃水浴。