[发明专利]参类药材中抗凝药效成分的确定方法

权利要求书

1.一种参类药材中抗凝药效成分的确定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

分别对多个参类药材样品进行皂苷成分提取，得到与各参类药材样品对应的第一提取物，其中所述参类药材样品属于不同品种；

通过液相色谱-质谱联用仪分别对各第一提取物进行分析，得到与各第一提取物分别对应的色谱图；

从所述色谱图中选取若干备选峰；

从所述第一提取物中选取待处理提取物，配置所述待处理提取物的水溶液；

对所述待处理提取物的水溶液进行凝血活性测试，获得凝血活性测试结果，对所述待处理提取物的水溶液中与各备选峰对应成分的含量及所述凝血活性测试结果进行灰色关联分析，以确定所述备选峰中具有药效的目标成分对应的目标峰；

根据各目标峰对应的质谱图，确定各目标峰对应的目标成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述从所述色谱图中选取若干备选峰，具体包括：

对各第一提取物对应的色谱图中的色谱峰进行匹配；

将匹配成功的色谱峰作为所述备选峰。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述从所述提取物中选取待处理提取物，配置所述待处理提取物的水溶液之后，所述方法还包括：

基于所述备选峰在所述待处理提取物的色谱图中的峰面积，确定待处理提取物的水溶液中与各目标峰对应的各成分的含量。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述分别对多个参类药材样品进行皂苷成分提取，得到与各参类药材样品对应的第一提取物，具体包括：

分别对多个参类药材样品进行乙醇提取、浓缩、洗涤及萃取操作，得到与各参类药材样品对应的第一提取物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分别对多个参类药材样品进行乙醇提取、浓缩、洗涤及萃取操作，得到与各参类药材样品对应的第一提取物，具体包括：

分别对多个参类药材样品进行多次乙醇回流提取，收集提取液；

对所述提取液进行离心后，减压浓缩至干，再用水溶解，得水溶液；

通过石油醚对所述水溶液进行洗涤，保留水层溶液；

通过醇类萃取剂对所述水层溶液进行多次，合并萃取液；

对所述萃取液进行纯水洗涤，合并洗涤液，减压浓缩至干，得到与各参类药材样品对应的第一提取物。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述分别对多个参类样品进行乙醇提取、浓缩、洗涤及萃取操作，得到与各参类药材样品对应的第一提取物之后，所述方法还包括：

从所述参数类样品中选取目标参类药材样品，并通过不同浓度的乙醇溶液对所述目标参类药材样品进行提取、浓缩、洗涤及萃取操作，得到与所述目标参类药材样品对应的第二提取物；

通过液相色谱-质谱联用仪分别对所述第二提取物进行分析，得到与所述第二提取物对应的色谱图；

通过第一提取物和第二提取物的色谱图对所述第一提取物和第二提取物进行主成分分析，确定制备方式对参类药材中药性成分含量的影响。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述分别对多个参类药材样品进行多次乙醇回流提取，收集提取液，具体包括：

通过8倍量的75％乙醇溶液分别对多个参类药材样品进行2次回流，回流时间为2～3.5h，收集提取液。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述根据各目标峰对应的质谱图，确定各目标峰对应的目标成分之后，所述方法还包括：

通过所述目标成分与凝血酶的分子对接效果，对所述目标成分的药效进行验证。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述通过所述目标成分与凝血酶的分子对接效果，对所述目标成分的药效进行验证，具体包括：

获取凝血酶和各目标成分的分子模型；

从所述凝血酶的分子模型中选取活性位点；

基于各目标成分的分子模型与活性位点的结合情况，确定各目标成分的药效。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其特征在于，所述从所述提取物中选取待处理提取物，配置所述待处理提取物的水溶液，具体包括：

从所述提取物中选取待处理提取物，配置不同浓度的所述待处理提取物的水溶液；

相应地，所述对所述提取物的水溶液进行凝血活性测试，获得凝血活性测试结果，对所述待处理提取物的水溶液中与各备选峰对应的各成分的含量及凝血活性测试结果进行灰色关联分析，从所述备选峰中确定参类药材中具有药效的目标成分对应的目标峰，具体包括：

分别对各种浓度的所述待处理提取物的水溶液进行凝血活性测试，获得与各水溶液对应的凝血活性测试结果，对各水溶液中与各备选峰对应的各成分的含量值及凝血活性测试结果进行灰色关联分析，确定参类药材中具有药效的目标成分对应的目标峰，及各目标成分的药效与浓度的对应关系。