[发明专利]一种甘松愈伤组织细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201910710851.8 | 申请日： | 2019-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN112293250B | 公开（公告）日： | 2023-02-17 |
| 发明（设计）人： | 李惠玲;蒋耀权;章漳 | 申请（专利权）人： | 伽蓝（集团）股份有限公司 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201403*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 甘松 组织细胞 培养 方法 | ||
1.一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A:取野生甘松的叶柄和叶片冲洗消毒，得到基部组织；
步骤B:将步骤A制得的基部组织切割后接种于愈伤组织诱导培养基中进行培养，得到愈伤组织；
步骤C:将步骤B制得的愈伤组织接种到愈伤组织继代培养基中进行继代培养，得到继代愈伤组织细胞；
对所述步骤C得到的继代愈伤组织细胞进行低温处理，得到具有活性物的甘松胚性愈伤组织细胞, 所述低温处理步骤包括：把甘松愈伤组织细胞放入4℃低温分别处理1d，3d，5d，7d；
其中，步骤B中所述愈伤组织诱导培养基的组分为：MS+NAA 0.3 ~0.8 mg/L+6-BA 0.6~1.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，
步骤C中所述愈伤组织继代培养基的组分为：MS+6-BA 0.5 ~2.0mg/L+NAA 0.2~1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。
2.如权利要求1所述的一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，在所述诱导培养和继代培养过程中，培养条件为温度20±1℃，湿度60% ~70%，每天光照12小时，光照强度为1500 Lx~ 2000Lx。
3.如权利要求2所述的一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤A中，冲洗消毒步骤如下：在自然水下流水冲洗1~2 h后，在无菌环境中，用70%乙醇消毒30 s；无菌水冲洗3次，再用滴有1-2滴Tween20 的0.1% HgCl2 消毒6 min；无菌水冲洗3 ~5次后，用无菌滤纸吸干表面水分。
4.如权利要求2所述的一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤B中，基部组织在超净台中，用无菌解剖刀将消毒好的叶柄和叶片切割成0.5 ~0.8 cm长的外植体。
5.如权利要求4所述的一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤B中，诱导培养周期为20天。
6.如权利要求1所述的一种甘松愈伤组织细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤C中，继代培养周期为25-40天。
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