[发明专利]一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法

说明书

本发明公开了一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，包括：链霉亲和素磁微粒的制备、链霉亲和素磁微粒悬浮液制备、生物素标记的胎盘生长因子的制备、化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体的制备等步骤；本发明中链霉亲和素磁微粒通过链霉亲和素和生物素之间的高亲和力作用，可以绑定任何生物素标记的分子，链霉亲和素磁微粒可用于免疫及分子检测，本发明采用聚苯乙烯磁微粒，具有粒径均一、比表面积大、形貌规整的特点，有利于快捷、高效地捕获目标分子以及实现磁性分离，本发明建立的磁微粒化学发光法具有特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果准确、重复性好等优点。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法。

背景技术

胎盘生长因子(PLGF)最早于1991年由Maglione等从人的胎盘cDNA文库中分离纯化而得。PLGF主要由合体滋养层细胞合成，可与位于滋养层细胞和血管内皮细胞的酪氨酸酶受体结合，是一个对滋养层细胞功能有自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白。PLGF对滋养层细胞和内皮细胞功能有独特的调节作用，能够促进新生血管生成。检测孕妇血液PLGF水平在临床上可用于识别胎盘合体滋养层细胞存在供氧压力，对子痫前期进行预测、鉴别和治疗监测。

到目前为止，用于检测人血清中胎盘生长因子残留的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)，但是，酶联免疫法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度不够，只适用于微量物质的检测和鉴定；本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。

磁微粒可以作为生物大分子的载体，抗体包被的磁微粒称为免疫磁微粒，由于其既有结合抗原的特性又有磁性的特点，因此，在从复杂样品中分离、纯化与浓集目的微生物、细胞和生物大分子等方面具有较多优势，包括快速、特异性强、操作简便、使用范围广等。纳米材料是20世纪90年代后得到迅猛发展的新材料，纳米磁微粒(粒径小于10nm～100nm)在磁结构和磁性方面与一般磁微粒有很大区别：纳米磁性颗粒，单位体积颗粒数目更多，比表面积更大；具有超顺磁性，磁相互作用很弱；它可在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成份得以分离、浓集或纯化等。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，具有特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性等优点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)链霉亲和素磁微粒悬浮液制备：取链霉亲和素磁微粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁微粒，重复清洗5次后，用PBS缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液；

(2)生物素标记的胎盘生长因子的制备：取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入生物素原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到生物素标记的胎盘生长因子；

(3)化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体的制备：

取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入吖啶酯原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体；

(4)分装步骤1-3制备的试剂，组装成所述试剂盒。