[发明专利]一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法

权利要求书

1.一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)链霉亲和素磁微粒悬浮液制备：取链霉亲和素磁微粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁微粒，重复清洗5次后，用PBS缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液；

(2)生物素标记的胎盘生长因子的制备：取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入生物素原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到生物素标记的胎盘生长因子；

(3)化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体的制备：

取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入吖啶酯原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体；

(4)分装步骤1-3制备的试剂，组装成所述试剂盒。

2.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，包括链霉亲和素磁微粒溶液的制备方法。

3.如权利要求2所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒溶液的制备方法包括：将磁流体和聚乙二醇溶于无水乙醇中，移入带有搅拌器、冷凝管和N₂入口的三颈瓶中，N₂气氛中，65℃条件下，300r/min搅拌30min,然后升温至70℃，依次加入苯乙烯、马来酸酐、丙烯酸、二乙烯基苯、过氧化苯甲酰，10min后，反应物成乳液状，保持N₂气氛，70℃，搅拌速度300r/min，反应时间12h，反应完成后聚苯乙烯磁微粒收集备用；将PBS缓冲液进行高压灭菌，霉亲和素溶于PBS缓冲液中，取200ul装于EP管中待用；将聚苯乙烯磁微粒放入超纯水中浸泡，用PBS缓冲液清洗3次后，再加入PBS缓冲液中，超声分散后得到聚苯乙烯磁微粒分散液；取聚苯乙烯磁微粒分散液，加入的戊二醛室温震荡反应，进行磁分离，用纯水清洗多余的戊二醛3-5次，再次将聚苯乙烯磁微粒悬浮于PBS缓冲液中，然后再加入到装有链霉亲和素容液的EP管中，室温震荡培养，最后将链霉亲和素磁微粒分散在PBS溶液中，4℃保存待用。

4.如权利要求1或3所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液的浓度为50mmol/L，pH为7.8。

5.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。

6.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述标记缓冲液为20mmol/L PBS，150mmol/L NaCl，pH8.0。

7.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述封闭缓冲液为20mmol/L PB，150mmol/L NaCl，10％赖氨酸，pH8.0。

8.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，胎盘生长因子抗体与吖啶酯原液的摩尔比为10:1。