[发明专利]一种肿瘤来源外泌体及其制备方法和用途有效
| 申请号： | 201910696060.4 | 申请日： | 2019-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN111117964B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 段海峰;薛冰华;于婷婷;肖秀孝;解晶;庞如梦;弓景波;张群伟;鲁飞 | 申请（专利权）人： | 段海峰;北京双因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人： | 范国锋;路永斌 |
| 地址： | 100070 北京市丰台*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 来源 外泌体 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种用于预防接种的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤I，获取DC细胞；
步骤II，负载外泌体，获得所述药物组合物；步骤II包括以下子步骤：
步骤II-1，向DC细胞中添加外泌体，共培养一段时间后收集细胞；
所述外泌体按照包括以下步骤的方法制备：
步骤1，获取正常分泌的肿瘤来源外泌体；
其按照以下步骤获取：
步骤1-1，预先培养肿瘤细胞；所述肿瘤细胞为黑色素瘤细胞，
步骤1-2，细胞正常传代培养过程中，加入DMEM培养基，培养，收集细胞上清，
步骤1-3，将收集到的细胞上清进行多次离心，获得沉淀，对沉淀进行漂洗，重悬；
步骤2，对步骤1获取的肿瘤来源外泌体进行检测；
步骤3，对步骤2检测后的肿瘤来源外泌体进行灭活处理；
采用水浴加热处理外泌体，
所述水浴处理的温度为56℃和65℃中的一个或两个的组合；处理时间为0.25~3h；
步骤II-2，对收集的细胞进行离心，重悬细胞沉淀，加入诱导因子二，继续培养；
所述诱导因子二包括GM-CSF、IL-4和LPS；
步骤II-3，收集细胞，离心后洗涤沉淀，再离心后重悬，调整浓度。
2.权利要求1所述方法制备的药物组合物在制备治疗肿瘤药物方面的用途。
3.一种灭活的肿瘤来源外泌体在制备治疗肿瘤药物方面的用途，其特征在于，
所述灭活的肿瘤来源外泌体按照包括以下步骤的方法制备：
步骤1，获取正常分泌的肿瘤来源外泌体；
其按照以下步骤获取：
步骤1-1，预先培养肿瘤细胞；所述肿瘤细胞为黑色素瘤细胞，
步骤1-2，细胞正常传代培养过程中，加入DMEM培养基，培养，收集细胞上清，
步骤1-3，将收集到的细胞上清进行多次离心，获得沉淀，对沉淀进行漂洗，重悬；
步骤2，对步骤1获取的肿瘤来源外泌体进行检测；
步骤3，对步骤2检测后的肿瘤来源外泌体进行灭活处理；
采用水浴加热处理外泌体，
所述水浴处理的温度为56℃和65℃中的一个或两个的组合；处理时间为0.25~3h；
所述制备治疗肿瘤药物包括将上述方法制备得到的灭活的肿瘤来源外泌体负载在DC细胞上的步骤。
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