[发明专利]一组用于鉴别乌龟、花龟及其杂交种的SNP标记

说明书

本发明公开了一组用于鉴别乌龟、花龟及其杂交种的SNP标记，所述SNP标记为：第一SNP标记为碱基A或G，位于SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的第88位，第二SNP标记为碱基T或C，位于SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的第105位，第三SNP标记为碱基C或T，位于SEQ ID NO：3所示核苷酸序列的第178位，第四SNP标记为碱基C或T，位于SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的第233位。本发明针对以上标记进行了引物设计并建立了检测方法，解决了乌龟、花龟及其杂交种鉴定困难的问题，为龟甲药材的真伪鉴别和监管提供了一种准确可靠且高效的检测手段。

技术领域

本发明涉及用于鉴别乌龟、花龟及其杂交种的SNP标记，以及用于检测所述SNP标记的引物对，本发明还涉及所述SNP标记及其引物对在鉴别乌龟、花龟及其杂交种中的用途，属于分子鉴定领域。

背景技术

乌龟(Chincmys reevesii)是我国传统药食两用动物药材，《神农本草经》列龟甲为上品，《本草纲目》明确描述了龟甲、龟肉、龟血等的药用价值。国家标准收载龟甲的成方制剂近百种，一些与乌龟相关的经典产品如龟甲胶、龟鹿二仙膏等蜚声海内外，广泛用于临床治疗和滋补养生。乌龟是中华人民共和国药典收录药材龟甲的法定来源，自20世纪90年代中期，随着人们对健康生活的广泛需求，龟类产品备受重视，乌龟养殖逐渐成为一种产业，已初具规模，但其生长缓慢，导致乌龟优质资源缺乏，市场掺伪极为严重。花龟(Ocadiosinensis)，又名台湾草龟、六线草龟等，属龟鳖目、淡水龟亚科、花龟属，自然界主要分布于广东、广西、海南、台湾等，生长速度快，个体较大，其龟壳被大量充当龟甲药材流入市场。此外乌龟与花龟的属间远缘杂交品种花杂草龟，具有母本乌龟以及父本花龟的适应性好以及生长速度快，并能够稳定遗传的优点，成为乌龟养殖户青睐品种，其龟壳也被用作龟甲药材充斥市场。由于花龟和乌龟亲缘关系较近，其杂交种兼顾亲本性状特征，为三种龟的鉴别带来了困难。目前的传统鉴别方式主要是通过龟的外部性状进行鉴别，该方法的经验依赖性强，准确率低，常由于经验缺乏，形态学特征相似或龟制品没有明显形态学特征而做出误判，导致龟甲的伪品或者掺伪品混入市场，带来不良后果。

近年来，分子鉴定技术以其快速、准确等优点，已在中药材鉴别中得到广泛应用，但由于花龟和乌龟亲缘关系近，且其杂交种兼顾亲本遗传信息，目前常用分子鉴定手段仍无法将其区分开。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术缺陷，提供用于鉴别乌龟，花龟及其杂交种的SNP标记，开发该SNP分子标记的引物，通过检测该SNP分子标记建立有效的鉴别方法对三种龟进行区分。

一组用于鉴别乌龟、花龟及其杂交种的SNP标记，所述SNP标记为：

第一SNP标记，所述第一SNP标记为碱基A或G，位于SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的第88位，或

第二SNP标记，所述第二SNP标记为碱基T或C，位于SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的第105位，或

第三SNP标记，所述第三SNP标记为碱基C或T，位于SEQ ID NO：3所示核苷酸序列的第178位，或

第四SNP标记，所述第四SNP标记为碱基C或T，位于SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的第233位。

一组用于检测所述的SNP标记的引物对，所述引物对为：

第一引物对，所述第一引物对具有SEQ ID NO：5-6所示的核苷酸序列，用于检测所述第一SNP标记，或

第二引物对，所述第二引物对具有SEQ ID NO：7-8所示的核苷酸序列，用于检测所述第二SNP标记，或

第三引物对，所述第三引物对具有SEQ ID NO：9-10所示的核苷酸序列，用于检测所述第三SNP标记，或