[发明专利]一种快速筛查试剂盒及引物组

权利要求书

1.一种快速筛查试剂盒，用于对细菌中磺胺耐药基因sul1和sul2、以及整合酶基因intI1、intI2和intI3的快速筛查，其特征在于：所述试剂盒包括：

(1)多重PCR反应液：含有DNA聚合酶、dNTP和PCR反应缓冲液；

(2)引物混合液：将如下的扩增sul1、sul2、intI1、intI2和intI3的5对引物用双蒸水溶解后分组混合；

扩增sul1的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示：

SEQ ID NO.1：5’-ATGGTGACGGTGTTCGG-3’

SEQ ID NO.2：5’-GCAAGGCTCGCTGGAC-3’

扩增sul2的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示：

SEQ ID NO.3：5’-CATTTTCGGCATCGTCA-3’

SEQ ID NO.4：5’-CAAGGCGGTTGCGTTT-3’

扩增intI1的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6所示：

SEQ ID NO.5：5’-GGACCAGTTGCGTGAGC-3’

SEQ ID NO.6：5’-TGCCCGTTCCATACAGA-3’

扩增intI2的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7～8所示：

SEQ ID NO.7：5’-TACGCTGCTGTATGGTGC-3’

SEQ ID NO.8：5’-TTTATTGCTGGGATTAGGC-3’

扩增intI3的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10所示：

SEQ ID NO.9：5’-ACCTGCCGATACAAGAACA-3’

SEQ ID NO.10：5’-AACCTGACTGCGTCCCTC-3’；

(3)阳性对照液：分别含有磺胺耐药基因sul1和sul2以及整合酶基因intI1、intI2和intI3的质粒水溶液的混合物。

2.根据权利要求1所述的一种快速筛查试剂盒，其特征在于：所述多重PCR反应液的组成为：每1000μL多重PCR反应液包括：DNA聚合酶8-30μL；dNTP32-140μL；PCR反应缓冲液100-120μL；用双蒸水补足至1000μL。

3.根据权利要求1或2所述的一种快速筛查试剂盒，其特征在于：所述PCR反应缓冲液为10×Ex Taq Buffer。

4.根据权利要求1所述的一种快速筛查试剂盒，其特征在于：所述引物混合液中，每条引物在引物混合液中的浓度分别为50-200μmol/L。

5.根据权利要求1所述的一种快速筛查试剂盒，其特征在于：所述阳性对照液中各质粒的浓度分别为0.1-10pg/μL。

6.一种用于多重PCR检测细菌中磺胺耐药基因sul1和sul2以及整合酶基因intI1、intI2和intI3的引物组，其特征在于：包括扩增sul1、sul2、intI1、intI2和intI3的5对引物，其核苷酸序列如下所示：

扩增sul1的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示：

SEQ ID NO.1：5’-ATGGTGACGGTGTTCGG-3’

SEQ ID NO.2：5’-GCAAGGCTCGCTGGAC-3’

扩增sul2的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示：

SEQ ID NO.3：5’-CATTTTCGGCATCGTCA-3’

SEQ ID NO.4：5’-CAAGGCGGTTGCGTTT-3’

扩增intI1的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6所示：

SEQ ID NO.5：5’-GGACCAGTTGCGTGAGC-3’

SEQ ID NO.6：5’-TGCCCGTTCCATACAGA-3’

扩增intI2的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7～8所示：

SEQ ID NO.7：5’-TACGCTGCTGTATGGTGC-3’

SEQ ID NO.8：5’-TTTATTGCTGGGATTAGGC-3’

扩增intI3的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10所示：

SEQ ID NO.9：5’-ACCTGCCGATACAAGAACA-3’

SEQ ID NO.10：5’-AACCTGACTGCGTCCCTC-3’。