[发明专利]一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒与方法

说明书

本发明提供了一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒与方法，所述试剂盒包括(1)SNP位点的上下游引物组：分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示；(2)DNA guides：分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示；(3)不同荧光基团标记的分子信标：如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示；(4)DNA编辑酶PfAgo；该方法特异性强，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，尤其涉及一种用于检测BRAC1基因 SNP的试剂盒与方法。

背景技术

1990年，研究者发现了一种直接与遗传性乳腺癌有关的基因，命名为乳腺癌1号基因，英文简称BRCA1。1994年，又发现另外一种与乳腺癌有关的基因，称为BRCA2。实际上，BRCA1/2是两种具有抑制恶性肿瘤发生的基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用。拥有这个基因突变的家族倾向于具有高乳腺癌发生率，通常发生在较年轻时，病人的两侧乳房都确癌，且同时患有卵巢癌。研究表明BRCA1基因上具有单核苷酸多态性SNP位点，而BRCA1基因的多态性会影响卵巢癌等肿瘤疾病的易感性。

SNP(Single nucleotide polymorphism)即单核苷酸多态性，主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的80％以上。在遗传学分析中，SNP作为一类遗传标记得到广泛应用，主要是因为SNP具有密度高、富有代表性、遗传稳定性和易实现自动化分析等特点。SNP作为第三代遗传标记已经广泛应用于基因作图、疾病相关性分析、群体遗传学及药物研究等领域，人类许多表型差异、对药物或疾病的易感性等都可能与SNP有关。

目前对已知SNP检测的方法主要有双向等位特异法、基因芯片法、荧光定量PCR技术等。(1)双向等位特异法(Bi-PASA)，该方法是在等位特异PCR 法的基础上发展而来，通过设计引物的3’端与一条待测等位基因的序列互补而与另一条不互补来区分SNP，虽然操作简单成本低，但是对引物设计要求高难以实现高通量检测。(2)基因芯片法是一种高通量SNP分析法，根据核苷酸的碱基配对原则设计探针使其只与完全互补的序列杂交而不与含有单个碱基错配的序列杂交，但这种方法对样品质量要求高，芯片设计制造昂贵。(3)荧光定量PCR技术(TaqMan技术)TaqMan探针基于杂交原理，是按常规方式进行体外基因扩增，在反应体系中加入针对位点及侧翼序列设计的探针，该探针只有一个碱基的差异，分别对应于不同的等位基因，并用荧光标记探针。该方法优点在于反应在过程中进行，无需分离或洗脱过程，从而减少了污染的可能性：扩增产物分析简便、快捷、准确、无需电泳，提高了实验速度，缺点是所设计的探针仅有一个碱基的差异，检测结果存在假阳性。

一个理想的检测SNP的方法应该具备以下优点：①操作简便、迅速；②分析费用低，特殊试剂用量少；③即使不纯的样品也可得到可靠的结果；④数据分析简单。目前报道的SNP检测方法中，尽管有些方法成本低，但速度慢，操作复杂对样品质量要求高；有些方法可自动化高通量分析，但制备探针成本高，准确性低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒与方法，该方法操作简单，成本低，准确性高以及灵敏度高的SNP检测方法。

本发明是这样实现的：

本发明的目的之一在于提供一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，所述试剂盒包括SNP位点的上下游引物组；DNA guides、不同荧光基团标记的分子信标、以及DNA编辑酶PfAgo；

所述SNP位点的上下游引物组包括以下A、B中至少一个：