[发明专利]一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒与方法

权利要求书

1.一种用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SNP位点的上下游引物组；DNA guides、不同荧光基团标记的分子信标、以及DNA编辑酶PfAgo；

所述SNP位点的上下游引物组包括以下A、B中至少一个：

A、rs12516位点的上、下游引物组：rs12516位点的上、下游引物分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示；

B、rs16941位点的上、下游引物组：rs16941位点的上、下游引物分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示；

所述DNA guides包括以下C、D中至少一个：

C、针对rs12516位点的3条DNA guides包括如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示的序列；

D、针对rs16941位点的3条DNA guides包括如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.12所示的序列；

所述不同荧光基团标记的分子信标包括以下E、F中至少一个：

E、针对rs12516位点T/C的分子信标分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14所示；

F、针对rs16941位点A/G的分子信标分别如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示；

其中，所述分子信标的5’端均标记有荧光基团和3’端均标记有猝灭基团。

2.如权利要求1所述的用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，其特征在于，还包括PCR扩增所需的常规溶液。

3.如权利要求2所述的用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增所需的常规溶液包括2×Taq-Mix；或者所述PCR扩增所需的常规溶液包括2×Phanta BloodBuffer V2、Phanta Blood Super-Fidelity DNA polimerase、dNTPs。

4.如权利要求1所述的用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，其特征在于，所述DNA guides均用T4多核苷酸激酶处理使其5’端带上磷酸基团。

5.如权利要求1所述的用于检测BRAC1基因SNP的试剂盒，其特征在于，所述分子信标的5’端标记的荧光基团为有机荧光染料或量子点无机染料中的任一种，3’端标记猝灭基团为有机染料的任一种或者金纳米粒子；所述有机荧光染料为FAM、VIC、HEX、TRT、Cy3、Cy5、ROX、JOE和Texas Red，所述有机猝灭染料为TAMRA、DABCYL、MGB、BHQ-1、BHQ-2和BHQ-3。

6.一种用于检测BRAC1基因SNP的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、准备含有不同HPV亚型的待检测离体样品并提取核酸得到待测样品模板；

步骤2、采用权利要求1-5所述的SNP位点的上下游引物组对步骤1所得的待测样品模板进行PCR得到PCR扩增产物；

步骤3、将权利要求1-5所述的DNA guides、不同荧光基团标记的分子信标、DNA编辑酶PfAgo与步骤2所得的PCR扩增产物混合，进行酶切反应；

步骤4、将上述反应产物用荧光光度计测得不同荧光基团得发光情况，从而判断待检测样品中BRAC1基因SNP的碱基组成，从而实现SNP检测。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤2中PCR扩增程序为：95℃，5min预变性；95℃，15S变性，56～72℃，15S退火，72℃，30S延伸；35个循环；72℃，5min。