[发明专利]一种脂肪酶在制备D-托品酸甲酯中的应用

权利要求书

1.一种脂肪酶在制备D-托品酸甲酯中的应用，其特征在于所述脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含脂肪酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体冻干后的脂肪酶粗酶粉为生物催化剂，以外消旋DL-托品酸甲酯为底物，以pH 7.0缓冲液为反应介质，在25-50℃、200rpm条件下进行拆分反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得D-托品酸甲酯。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述催化剂用量以缓冲液体积计为5g/L-40g/L，所述底物体积用量以缓冲液体积计为0.5%-3%。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于反应时间为30min-120min。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述反应条件为35℃、200rpm反应60min。

6.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH 7.0、0.2 mM的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲溶液。

7.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含脂肪酶编码基因的工程菌接种在LB培养基中，37℃培养OD₆₀₀至为0.4-0.6，加IPTG至终浓度0.02 mM，30℃培养10-12 h，发酵液8000 rpm，4℃离心10min，收集菌体，再用磷酸缓冲液洗涤菌体2次，8000 rpm，4℃离心10min，收集湿菌体，冻干后得到脂肪酶粗酶粉。

8.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，反应液先用2M NaOH水溶液调pH至9.0，用等体积正己烷萃取，分液漏斗分离出有机相，经去离子水洗涤两次，饱和NaCl洗涤两次，干燥，旋蒸，得到最终产物D-托品酸甲酯。