[发明专利]一种用于选择性检测人血清白蛋白的自组装纳米荧光探针的应用

说明书

本发明公开了一种新型酰肼希夫碱形成的自组装纳米粒子作为荧光探针使用，酰肼希夫碱在PBS缓冲液中自组装形成纳米体系，可用于人血清白蛋白（HSA）定性和定量检测。该探针优点是基于自组装和扭曲的分子内电荷转移机理，探针本身几乎没有荧光信号，与待测物作用后有明显的荧光增强现象，其合成路线简便，产率高，自组装形成纳米体系均匀快速，对待测物选择性好，灵敏度高。本发明的自组装纳米荧光探针可用于生物及临床检验样品中HSA的检测，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于荧光探针检测及应用技术领域，更加具体地说，涉及一种酰肼希夫碱自组装形成的纳米荧光探针在检测HSA中的应用。

背景技术

人血清白蛋白(HSA)是人体中含量最丰富的转运蛋白，在调节胶体渗透压、传递激素、转运营养物质、代谢产物和药物等多种生物学功能中发挥着重要作用。此外，它也是评估肾脏损害的常规临床生物标志物。健康人血清中HSA浓度约为35-50 g/L，尿液中HSA浓度小于30 mg/L。当肾脏受损时，患者尿液中的HSA水平升高。因此，HSA在临床上是一种合适的诊断慢性肾病的生物标志物，精确检测血清和尿液中HSA的水平，可以有效地早期诊断或预防慢性肾病，以及监测慢性肾病患者的生理状况。因此，HSA含量的测定具有极为重要的研究和应用意义。

目前，检测HSA的方法主要有免疫分析法、液质联用蛋白组学法、电化学和BCG比色法等。然而，这些方法需要昂贵的设备和技术支撑，以及耗费的时间长，流程复杂，不利于HSA的实时快速检测。而荧光探针技术具有成本低，高灵敏度，响应时间迅速和操作流程简单等特点，克服了传统检测手段的缺点，用于HSA检测的有机分子荧光探针技术获得了很大的进展。但是，目前报道的一些HSA荧光探针分子仍有一些局限性，比如检测限高、激发波长在短波长范围、水溶性差等。因此在实际应用中未能满足样品的检测范围，或者不能有效避免样品自发荧光的干扰以及不能用于生物体内目标物的检测。面对这些局限性，设计新型的HSA荧光探针分子是非常有必要的。目前，有机分子自组装纳米粒子由于其光学稳定性、良好的生物相容性、多样性和结构设计的灵活性，在HSA的传感领域引起了广泛的关注。然而，选择性和裸眼快速检测HSA的有机分子自组装纳米探针仍然很少。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新的酰肼希夫碱自组装形成的纳米荧光探针，可以作为高灵敏度、高选择性的HSA荧光分析手段，和现有文献中的探针（化合物）相比较，本发明的自组装纳米荧光探针水溶性好，检测限低，响应速度快，生物相容性好，稳定性强，制备简单、合成成本低等优势。

本发明作为HSA检测的应用通过下述技术方案予以实现：

用于HSA检测的酰肼希夫碱自组装形成的纳米荧光探针，具有如下所示的结构式：

所述酰肼希夫碱形成的自组装纳米荧光探针用于对HSA的定性和定量检测方面的应用。

所述酰肼希夫碱形成的自组装纳米荧光探针的合成具体如下：

（1）将吡嗪-2-羧酸充分溶解于无水甲醇中，然后加入适量浓硫酸加热回流4-6 h，待反应结束冷却后，用饱和NaHCO₃调节pH值至中性，用二氯甲烷萃取并保留二氯甲烷层，旋蒸除去溶剂后得油状物吡嗪-2-羧酸甲酯；将其用无水甲醇溶解后，逐滴加入水合肼，加热回流20-22 h后，冷却至室温，旋蒸除去甲醇得红色固体产物吡嗪-2-酰肼；

所述（1）中吡嗪-2-羧酸甲酯与水合肼投料物质的量之比为1:（1.5-5）。