[发明专利]用于包装重组人4型腺病毒的单质粒载体系统及其应用

权利要求书

1.一种用于包装重组人4型腺病毒的单质粒载体系统，其特征在于，所述载体系统含有E3区缺失的人4型腺病毒基因组，外源基因嵌入位点位于人4型腺病毒的包装信号之后、E1区之前，所述载体系统中人4型腺病毒E1区之前的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述载体系统在外源基因嵌入位点不含有控制表达元件，携带外源基因表达框的DNA片段直接克隆至所述载体系统的Pme I限制性酶切位点；或者，

在所述载体系统的外源基因嵌入位点正向嵌入控制外源基因表达的控制元件，所述控制元件为包含mCMV启动子和SV40多聚腺苷酸尾终止序列的DNA片段，所述控制元件两端为Pme I位点，控制元件中的外源基因克隆位点为Swa I，外源基因DNA片段直接克隆至所述载体系统的Swa I限制性酶切位点；或者，

在所述载体系统的外源基因嵌入位点反向嵌入控制外源基因表达的控制元件，所述控制元件为包含mCMV启动子和SV40多聚腺苷酸尾终止序列的DNA片段，所述控制元件两端为Pme I位点，所述控制元件中的外源基因克隆位点为Swa I，外源基因DNA片段直接克隆至所述载体系统的Swa限制性酶切位点。

2.一种应用权利要求1所述的单质粒载体系统包装重组人4型腺病毒的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）使用PacI限制性内切酶线性化人4型腺病毒载体重组质粒；

（2）将线性化片段转染HEK293细胞中，培养至细胞病变；

（3）冻融病变后的细胞培养液，连续传代至细胞持续病变；

（4）获得稳定传代的重组人4型腺病毒。

3.权利要求1所述的单质粒载体系统在诊断试剂盒、疫苗、基因治疗试剂盒和/或肿瘤治疗药物制备的应用。