[发明专利]pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法及应用

说明书

本发明属于两性离子纳米药物载体与药物输送技术领域，pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法及应用。通过对纳米材料修饰改性，利用肿瘤组织的特异性，以化学偶联或者包封的方式将抗肿瘤药物包埋到纳米药物载体中，以期能够实现药物在不同组织间的特异性分布，在达到高效给药的目的的同时降低药物对正常组织的损伤。本发明合成了新型的两性离子纳米材料dHAD，通过自组装形成的pH响应性胶束，用于递送疏水性抗肿瘤药物阿霉素，在药物载体领域展现了广阔的前景。

技术领域

本发明属于两性离子纳米药物载体与药物输送技术领域，本发明具体涉及pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法及应用。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic acid,HA)，是一种天然的高分子酸性勃多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，无毒、无免疫原性的聚合物。其自身的竣基和轻基官能团可以通过交联或者偶联反应来化学修饰。因此，作为靶向配体对于肿瘤治疗具有应用前景。药物治疗恶性肿瘤依然存在药物利用率低、选择性差和多药耐药性等问题。

盐酸表阿霉素(epi-rubicin hydrochloride，EPI，表柔比星)是一种高效、广谱的蒽环类抗肿瘤药物，作为一种抗癌药物已被应用于临床，长期的使用可发生严重的不良反应，如骨髓抑制、心脏毒性和过敏反应等，尤其是药物蓄积引起的剂量依赖性的骨髓抑制、心脏毒性，成为限制其临床应用的主要因素。近年来已开发出多种降低其不良反应方法，如微球、乳剂、脂质体等，但仍存在着一些问题，如盐酸表阿霉素脂质体粒径较大，载药量较低，不方便工业化生产。因此迫切需要研究并且开发针对于肿瘤细胞进行精准定位、粒径小、载药量较高的盐酸表阿霉素制剂的相关制备技术。

发明内容

为了克服现有技术的不足，为了解决阿霉素长期的使用可发生严重的不良反应，如骨髓抑制、心脏毒性和过敏反应等。本发明提供pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，本发明制备的透明质酸衍生物与阿霉素形成的胶束粒径较小且粒径分布均匀。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法；包括如下步骤：

(1)去乙酰化的透明质酸两性离子多糖dHA的制备：制备反应物；100-300mL乙醇对反应物进行沉淀，并在4℃静置6h以上；抽滤后得到沉淀，真空干燥24h以上；将中间产物溶于15-25mL冰乙酸中，加入5-15mL碘酸，4℃静置2h以上，然后加入1-10氢碘酸搅拌15min以上；反应液用无水乙醚萃取，然后用去离子水透析，将透析液冷冻干燥，得到去乙酰化的透明质酸两性离子多糖dHA；

(2)pH值响应两性离子的透明质酸聚合物dHAD的制备：取去乙酰化的透明质酸两性离子多糖(dHA)溶于去离子水中，然后加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)作为缩合剂，滴加N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)调节溶液pH值，-4℃冰浴条件下搅拌2h以上；随后将反应温度升至室温，将十二胺溶于四氢呋喃中，缓慢滴加至上述溶液中，在氮气保护条件下，室温反应24h以上；将反应液透析，冻干，得到pH值响应两性离子的透明质酸聚合物dHAD；

(3)通过超声透析法制备pH值响应两性离子的透明质酸聚合物-阿霉素dHAD-DOX载药胶束：首先，对阿霉素盐酸盐(DOX·HCl)进行脱盐处理；将DOX·HCl溶解在3-5mL甲醇中并加入三乙胺(TEA)，在室温下避光搅拌24h以上，将反应溶液在30-50℃下进行旋转蒸发并进行冷冻干燥，得到脱盐阿霉素(DOX)；取dHAD聚合物分散在等重量比的PBS缓冲液中，并将DOX溶解在与其等重量比的甲醇中，然后边搅拌边将DOX的甲醇溶液缓慢注入聚合物溶液中；将混合溶液置于37℃的恒温摇床上振荡4h；将最终的混合溶液通过透析袋(MWCO7000Da)用去离子水透析48h以上，冻干并在4℃下保存。