[发明专利]pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法及应用

权利要求书

1.pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，包括如下步骤：

(1)去乙酰化的透明质酸两性离子多糖dHA的制备：制备反应物；100-300mL乙醇对反应物进行沉淀，并在4℃静置6h以上；抽滤后得到沉淀，真空干燥24h以上；将中间产物溶于15-25mL冰乙酸中，加入5-15mL碘酸，4℃静置2h以上，然后加入1-10mL氢碘酸搅拌15min以上；反应液用无水乙醚萃取，然后用去离子水透析，将透析液冷冻干燥，得到去乙酰化的透明质酸两性离子多糖dHA；

(2)pH值响应两性离子的透明质酸聚合物dHAD的制备：取去乙酰化的透明质酸两性离子多糖溶于去离子水中，然后加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)作为缩合剂，滴加N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)调节溶液pH值，-4℃冰浴条件下搅拌2h以上；随后将反应温度升至室温，将十二胺溶于四氢呋喃中，缓慢滴加至上述溶液中，在氮气保护条件下，室温反应24h以上；将反应液透析，冻干，得到pH值响应两性离子的透明质酸聚合物dHAD；

(3)通过超声透析法制备pH值响应两性离子的透明质酸聚合物-阿霉素dHAD-DOX载药胶束：首先，对阿霉素盐酸盐(DOX·HCl)进行脱盐处理；将DOX·HCl溶解在3-5mL甲醇中并加入三乙胺(TEA)，在室温下避光搅拌24h以上，将反应溶液在30-50℃下进行旋转蒸发并进行冷冻干燥，得到脱盐阿霉素(DOX)；取dHAD聚合物分散在等重量比的PBS缓冲液中，并将DOX溶解在与其等重量比的甲醇中，然后边搅拌边将DOX的甲醇溶液缓慢注入聚合物溶液中；将混合溶液置于37℃的恒温摇床上振荡4h；将最终的混合溶液通过透析袋(MWCO7000Da)用去离子水透析48h以上，冻干并在4℃下保存；

所述步骤(1)中制备反应物具体步骤为：称取透明质酸钠和硫酸联氨，随后加入的水合肼溶液进行溶解，氮气保护50-70℃反应72h以上；或者为：称取NaOH，溶于去离子水中，然后加入透明质酸，氮气保护下65-75℃油浴反应6-12h；NaOH为40％NaOH，透明质酸与NaOH的质量比范围是1:20-40。

2.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)中所述的透明质酸钠与硫酸联胺的质量比为2:1，透明质酸钠与水合肼的质量比为1:30。

3.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)中所述的冰乙酸为质量分数为5％的溶液；所述的碘酸的摩尔质量为0.1M。

4.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)中所述的乙醇均为-4℃冰乙醇。

5.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)中所述的氢碘酸为质量分数为50％的溶液。

6.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)中所述的无水乙醚萃取，无水乙醚与反应液的体积比为1:1。

7.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(2)中所述的DMTMM与dHA的摩尔比为1:1；所述步骤(2)中所述的DIPEA调节pH值范围为7-8；所述步骤(2)中所述的十二胺与dHA的摩尔比为2：1；所述步骤(2)中所述去离子水和四氢呋喃，二者的体积比为1:1。

8.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(3)中脱盐处理时DOX·HCl与三乙胺的摩尔比为1:1-2；所述步骤(3)中dHAD聚合物与DOX的质量比为10:1。

9.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法，其特征是，所述步骤(1)和(2)中所述的透析，其透析时间均为72h，所述步骤(3)中透析时间为48-72h，每隔6h换一次透析液。

10.如权利要求1所述的pH值响应两性离子透明质酸胶束递送阿霉素方法在递送阿霉素的应用。