[发明专利]一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统

权利要求书

1.一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于，所述系统涉及以下步骤：

S1、研究COPB2、NUPR1单个或者组合的表达量与临床PCA的关系，以及与CRPC患者进展及预后相关性；

S2、探索COPB2与NUPR1在前列腺癌中互相调控的关系，并探索对肿瘤增殖和侵袭的影响及其关键机制，所述S2具体的包括以下步骤：

A1、Affymetrix全基因表达谱芯片的制作及IPA分析；

A2、研究COPB2与NUPR1在前列腺癌中相互调控并对肿瘤增殖和侵袭的影响；

A3、Co-IP检测COPB2与NUPR1相互结合；

A4、检测COPB2与NUPR1定位变化；

A5、寻找COPB2与NUPR1互相调控下游关键信号。

2.根据权利要求1所述的一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于，所述S1中：

先收集200例前列腺癌组织标本，病理诊断200例癌及癌旁组织；

免疫组化半定量测定组织中COPB2和NUPR1的表达；

设定染色阳性率评分标准：0％为0分；1-25％为1分；26-50％为2分；51-75％为3分；76-100％为4分，染色程度区分标准：无为0分；低为1分；中为2分；高为3分；

单倍型积分值(IHS)＝染色阳性率×染色程度，高于6分为高表达，低于6分为低表达；

将检测结果进行分组：COPB2低表达、COPB2高表达、NUPR1低表达、NUPR1高表达、COPB2高表达+NUPR1低表达、COPB2高表达+NUPR1高表达、COPB2低表达+NUPR1低表达、COPB2低表达+NUPR1高表达；

收集上述200例患者初诊PSA值、病理、预后资料，利用SPSS、Fisher及卡方检验分析分类变量与COPB2和NUPR1表达量的关系，利用Cox回归模型预测复发及进展因素，最后采用Kaplan-Meier分析绘制复发及无病生存曲线。

3.根据权利要求1所述的一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于，所述A1中具体操作步骤为：

准备COPB2干扰组和阴性对照组，每组3个复孔，提取总RNA，RNA质检，芯片杂交、洗染和扫描，最后完成芯片上机分析；

制作火山图、散点图、聚类图、疾病与功能分析、经典通路分析，并采用IngenuityPathway Analysis软件分析预测COPB2干扰后关键基因的改变，通过Z-score值，激活预测蛋白NUPR1作为研究的对象，利用生物信息学及IPA软件制作NUPR1的调控网络图。

4.根据权利要求1所述的一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于：所述A2中包括以下部分：

病毒感染细胞、

增殖、侵袭功能学实验、

裸鼠皮下成瘤实验。

5.根据权利要求4所述的一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于，所述病毒感染细胞具体步骤为：

实验设siCOPB2+siNUPR1、OE-COPB2+siNUPR1、siCOPB2、OE-COPB2、对照COPB2和对照NUPR1共6组，病毒感染PC-3/DU-145/CWR22RV1/LNCaP细胞，预实验确定最佳MOI、感染条件及感染效率，正式实验为感染3天后观察感染效率，每组细胞分为两份，一份提取细胞总RNA，一份提取总蛋白，RNA→cDNA→qRT-PCR检测3组中COPB2mRNA定量表达；根据WesternBlot法步骤检测3组中COPB2蛋白的表达。

6.根据权利要求1所述的一种基于COPB2与NUPR1的前列腺癌预测系统，其特征在于，所述增殖、侵袭功能学实验包括以下内容：

CCK8法检测细胞生长、

流式细胞周期、

流式细胞凋亡、

克隆形成检测细胞增殖能力、

划痕愈合实验检测细胞迁移能力、

检测细胞侵袭能力。