[发明专利]一种脐带间充质干细胞冻存液及冻存方法

说明书

本发明公开了一种脐带间充质干细胞冻存液及冻存方法，该冻存液包括以下组分：DMEM/F12基础培养基，二甲基亚砜，海藻糖，人层粘连蛋白，人α1‑酸性糖蛋白，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素和香菇多糖。本发明的脐带间充质干细胞冻存液不含动物源血清，无临床应用风险，采用本发明冻存液以及冻存方法冻存后进行复苏，脐带间充质干细胞的存活率高，具有良好的分化潜能，复苏效果好。

技术领域

本发明涉及细胞技术领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞冻存液及冻存方法。

背景技术

脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它具有较高的分化潜能，能分化成骨、软骨、肌肉、心肌等多种组织细胞，还具有取材方便、无伦理学争议等优点，在组织工程方面具有广阔的临床应用前景。由于过度传代会使脐带间充质干细胞明显衰老或凋亡，失去多分化潜能，因此脐带间充质干细胞的冻存成为其临床研究、使用的重要工序。

由于在冻存过程中容易形成冰晶，导致细胞的机械性损伤和渗透性损伤，影响了干细胞的存活率和生物学特性，因此干细胞的超低温冻存需要加入合适的冻存液。现有的脐带间充质干细胞冻存液组分主要包括动物源血清和二甲基亚砜，由于血清成分不能稳定控制，存在批间差异大、生产不稳定等问题，还会带来排异反应的风险。为了解决上述问题，无血清冻存液成为一种可行的替代方案。但是，目前的脐带间充质干细胞无血清冻存液冻存后复苏的细胞存活率低，不能满足临床应用的需求。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种脐带间充质干细胞冻存液及冻存方法。

本发明提出的脐带间充质干细胞冻存液不含动物源血清，无临床应用风险，采用本发明冻存液以及冻存方法冻存后进行复苏，脐带间充质干细胞的存活率高，具有良好的分化潜能，复苏效果好。

一种脐带间充质干细胞冻存液，包括以下组分：DMEM/F12基础培养基，二甲基亚砜，海藻糖，人层粘连蛋白，人α1-酸性糖蛋白，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素和香菇多糖。

优选地，所述二甲基亚砜与所述DMEM/F12培养基的体积比为(0.05～0.08)：1，所述海藻糖在所述冻存液中的浓度为1～1.5mg/mL，所述人层粘连蛋白在所述冻存液中的浓度为6～8μg/mL，所述人α1-酸性糖蛋白在所述冻存液中的浓度为10～15μg/mL，所述硫酸乙酰肝素在所述冻存液中的浓度为40～50μg/mL，所述硫酸软骨素在所述冻存液中的浓度为100～120μg/mL，所述香菇多糖在所述冻存液中的浓度为20～30μg/mL。

更优选地，所述二甲基亚砜与所述DMEM/F12培养基的体积比为0.06：1，所述海藻糖在所述冻存液中的浓度为1.4mg/mL，所述人层粘连蛋白在所述冻存液中的浓度为7.5μg/mL，所述人α1-酸性糖蛋白在所述冻存液中的浓度为12μg/mL，所述硫酸乙酰肝素在所述冻存液中的浓度为45μg/mL，所述硫酸软骨素在所述冻存液中的浓度为120μg/mL，所述香菇多糖在所述冻存液中的浓度为24μg/mL。

优选地，脐带间充质干细胞冻存液制备方法如下：

S1、将海藻糖，人层粘连蛋白，人α1-酸性糖蛋白，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素和香菇多糖在DMEM/F12基础培养基中溶解，得到混合液；

S2、将二甲基亚砜与所述混合液混合均匀，即得。

一种脐带间充质干细胞的冻存方法，使用上述脐带间充质干细胞冻存液。

优选地，脐带间充质干细胞的冻存方法包括：将脐带间充质干细胞与所述脐带间充质干细胞冻存液混匀，置于-80℃冻存过夜，然后转入液氮中长期冻存。

优选地，脐带间充质干细胞的冻存方法具体步骤包括：