[发明专利]一种脐带间充质干细胞冻存液及冻存方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞冻存液，其特征在于，包括以下组分：DMEM/F12基础培养基，二甲基亚砜，海藻糖，人层粘连蛋白，人α1-酸性糖蛋白，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素和香菇多糖。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述二甲基亚砜与所述DMEM/F12培养基的体积比为(0.05～0.08)：1，所述海藻糖在所述冻存液中的浓度为1～1.5mg/mL，所述人层粘连蛋白在所述冻存液中的浓度为6～8μg/mL，所述人α1-酸性糖蛋白在所述冻存液中的浓度为10～15μg/mL，所述硫酸乙酰肝素在所述冻存液中的浓度为40～50μg/mL，所述硫酸软骨素在所述冻存液中的浓度为100～120μg/mL，所述香菇多糖在所述冻存液中的浓度为20～30μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的脐带间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述二甲基亚砜与所述DMEM/F12培养基的体积比为0.06：1，所述海藻糖在所述冻存液中的浓度为1.4mg/mL，所述人层粘连蛋白在所述冻存液中的浓度为7.5μg/mL，所述人α1-酸性糖蛋白在所述冻存液中的浓度为12μg/mL，所述硫酸乙酰肝素在所述冻存液中的浓度为45μg/mL，所述硫酸软骨素在所述冻存液中的浓度为120μg/mL，所述香菇多糖在所述冻存液中的浓度为24μg/mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述的脐带间充质干细胞冻存液，其特征在于，制备方法如下：

S1、将海藻糖，人层粘连蛋白，人α1-酸性糖蛋白，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素和香菇多糖在DMEM/F12基础培养基中溶解，得到混合液；

S2、将二甲基亚砜与所述混合液混合均匀，即得。

5.一种脐带间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，使用权利要求1-4中任一项所述的脐带间充质干细胞冻存液。

6.根据权利要求5所述的脐带间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，将脐带间充质干细胞与所述脐带间充质干细胞冻存液混匀，置于-80℃冻存过夜，然后转入液氮中长期冻存。

7.根据权利要求6所述的脐带间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，具体步骤包括：

S1、向培养皿中加入0.02-0.03mL/cm²的浓度为0.25％的胰酶溶液对贴壁脐带间充质干细胞进行消化，然后加入相当于所述胰酶溶液体积8-10倍的无血清培养基终止消化，离心收集细胞；

S2、将收集得到的细胞与所述脐带间充质干细胞冻存液混合后轻轻吹打混匀，置于-80℃冻存过夜，然后转入液氮中长期冻存。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的脐带间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，用量为每mL脐带间充质干细胞冻存液中加入0.5～1.5×10⁷个脐带间充质干细胞。