[发明专利]一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法

说明书

本发明公开了一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法，本发明运用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC‑MS/MS)快速同时检测口服双参平肺颗粒后大鼠血浆中芒果苷、丹参酮IIA、人参皂苷Rg1、丹酚酸B、柚皮苷、甘草苷、隐丹参酮、知母皂苷BII和甘草酸的含量。该方法包括标准品储备液的配制、内标工作液的配制、标准曲线的制备、血浆样品处理和含量测定。本发明提供的方法灵敏度高、特异性强、重现性好、操作简单快速，符合体内生物样品测定要求，并能应用于双参平肺颗粒口服给药后的药代动力学研究。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是中成药体内代谢研究技术领域，具体涉及一种能快速同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法。

背景技术

双参平肺方是南京中医药大学范欣生教授优选的经典名方加减方，由人参、丹参、桑白皮、地骨皮、橘红、知母、天冬、甘草八味药组成，制成具有清肺润燥，镇咳止呕功效的颗粒剂，用以治疗气阴不足、痰瘀交阻之肺纤维化，临床疗效显著。

研究发现，双参平肺颗粒的主要成分是皂苷类、酚酸类、丹参酮类、黄酮类等化合物。人参皂苷Rg1，丹参酮IIA、隐丹参酮与丹酚酸B，柚皮苷，芒果苷与知母皂苷BII，甘草苷与甘草酸，分别是2015版《中国药典》中人参、丹参、橘红、知母、甘草的质控成分，大量文献对其药理活性进行了报道。但关于口服双参平肺颗粒后大鼠血浆中这9种成分的药代动力学研究还未见报道。为明确这9种功效成分在体内的代谢过程，须建立同时监测口服双参平肺颗粒后入血成分的浓度的方法，为双参平肺颗粒的后续研究提供可靠依据。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法，具体采用乙酸乙酯一步萃取法进行血浆前处理，选用多潘立酮单一内标，运用UPLC-MS/MS正负离子快速切换分析模式快速同时完成血浆中双参平肺颗粒主要活性成分的检测方法。并应用本发明方法开展药代动力学研究。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)标准品储备液的配制

分别精密称取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮IIA、芒果苷、知母皂苷BII、柚皮苷、甘草苷、甘草酸各10mg，分别置于10ml容量瓶中，加适量甲醇超声溶解，并定容至刻度线，分别制得1.00mg/ml标准品储备液；

(2)内标工作液的配制

精密称取多潘立酮1mg于10mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，并定容配成0.1mg/mL储备液；精密移取内标储备液适量，用甲醇稀释，配成浓度为0.1μg/mL的内标溶液；

(3)标准曲线的制备

用大鼠空白血浆，将步骤(1)的各标准品储备液配制成7个终浓度的系列血浆标准曲线样品：人参皂苷Rg11.3-650ng/mL；丹酚酸B 5.0-2495ng/mL；隐丹参酮4.5-2250ng/mL；丹参酮IIA 2.0-1000ng/mL；芒果苷4.5-2250ng/mL；知母皂苷BII5.0-2250ng/mL；柚皮苷5.0-2497.5ng/mL；甘草苷2.5-1252.5ng/mL；甘草酸1.5-751.2ng/mL；

分别取各系列血浆标准曲线样品，加入步骤(2)的内标物和甲酸，混匀，加入乙酸乙酯提取，离心，取上清液在离心浓缩仪上挥干，残渣用甲醇复溶，离心，取上清液注入液相色谱串联质谱法中进行分析；以待测物与内标的峰面积之比值(Y)为纵坐标，以待测物浓度(X)为横坐标，采用加权最小二乘法进行回归计算，得各标准曲线，计算权重为1/X²；

(4)血浆样品处理：