[发明专利]一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用

权利要求书

1.一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）使用V8酶结合V8酶与赖氨酰肽链内切酶联用酶解方法鉴别各种胰岛素，所述胰岛素包括人胰岛素、门冬胰岛素、赖脯胰岛素以及猪胰岛素；

（2）水解条件：采用缓冲液pH7.5～9.5的酶解环境；所述的缓冲液指的是Tris-Hcl缓冲液；

（3）V8酶与赖氨酰肽链内切酶反应液的配制：按照胰岛素:V8酶:赖氨酰肽链内切酶≈（100～1000）:（100～500）:1的质量比分别配制反应液；

（4）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比0.1%～1%甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，流速为0.2～0.6ml/min，柱温50～60℃，质谱检测器；

（5）色谱梯度条件如下：

表1 流动相梯度洗脱条件(体积比)

（6）测定法：取酶解样品注入液质联用仪，进行数据采集，测定酶解多肽片段的质谱图。

2.权利要求书1所述的鉴别方法，其特征在于样品包含原料和制剂；所述的原料和制剂指的是：重组人胰岛素原料、生物合成人胰岛素注射液、精蛋白生物合成人胰岛素注射液、精蛋白生物合成人胰岛素注射液（预混30R）、精蛋白生物合成人胰岛素注射液（预混50R）、门冬胰岛素原料、门冬胰岛素注射液、门冬胰岛素30注射液、门冬胰岛素50注射液。

3.权利要求书1所述的鉴别方法，其特征在于质谱检测得到特征肽段。

4.权利要求书1所述胰岛素质谱肽图的鉴别方法在准确快速鉴别胰岛素真伪，鉴别胰岛素具体类别方面的应用。