[发明专利]间充质干细胞膜片及其制备方法

说明书

本公开提供了一种在无血清培养体系中培养和制备的间充质干细胞膜片例如脐带间充质干细胞膜片以及相应制备方法。本公开还提供了间充质干细胞膜片在受损组织的损伤修复中的用途。

本申请要求于2019年02月28日递交的申请号为201910148322.3的中国专利申请的优先权，在此全文引用上述中国专利申请公开的内容以作为本申请的一部分。

发明领域

本发明涉及组织工程与再生医学领域，尤其涉及一种间充质干细胞膜片，其制备方法，以及间充质干细胞膜片的用途。

技术背景

间充质干细胞广泛存在于人体的组织中，具有体外扩增能力，多项分化潜能和免疫调节作用，目前已经被应用于自身组织修复和免疫相关疾病的治疗中。

目前在间充质干细胞用于自身组织修复的基础研究和临床应用中，大部分方法采用了细胞直接注射或者细胞与组织工程支架材料结合后移植的方法，这两者均具有一定的局限性。细胞直接注射会导致大量细胞丢失，治疗效率低，干细胞发挥组织修复的功能有限；而细胞与组织工程支架结合后进行移植尽管解决了细胞丢失的问题，但是支架材料在生物体内可能会引起不同程度的炎症反应，且支架材料的降解过程及降解产物可能使局部组织发生病变。因此，对于间充质干细胞的新的应用方式以及相关产品，本领域中仍然存在需要。

此外，目前广泛使用的间充质细胞培养体系中均含有血清成分。异体甚至异种来源的血清具有潜在的免疫风险，并且是病原微生物等的潜在载体，而且批次之间的均一性难以保证。自体来源的血清虽然避免了免疫风险，但是来源有限，批次之间质量难以控制，不利于培养体系的稳定。因此，需要解决上述与血清的使用相关的问题。

发明内容

本发明人通过在无血清培养体系中培养间充质干细胞，并制备细胞膜片的方式，获得了间充质干细胞膜片。上述细胞膜片具有生物安全性高，其中的活细胞率很高，且细胞状态良好，具备高效分化潜能和分泌各种促进血管生成和免疫调节相关因子的能力，从而完成了本发明。

相应的，在一个方面，本发明涉及一种间充质干细胞膜片，所述膜片不含有支架材料并且不含有血清组分，其中所述膜片中间充质干细胞的细胞比例为至少90％。在一些方案中，所述膜片中间充质干细胞的比例为至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％。

在一些实施方案中，用于制备所述间充质干细胞膜片的间充质干细胞可以来源于选自以下的组织：羊水、羊膜、绒毛膜、绒毛膜绒毛、蜕膜、胎盘、脐带血、华通氏胶、脐带、成人骨髓、成人外周血和成人脂肪组织。

在一些实施方案中，用于制备所述间充质干细胞膜片的间充质干细胞可以选自脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞，以及本领域已知的其它来源的间充质干细胞。在优选的实施方案中，所述间充质干细胞是脐带间充质干细胞。

本发明的间充质干细胞膜片可以使用不同传代数的间充质干细胞来制备。在一些实施方案中，使用传代数为P0-P20的间充质干细胞来制备细胞膜片。例如，可以使用传代数为P2-P15或P2-P10的间充质干细胞来制备细胞膜片。

在一些实施方案中，本发明的间充质干细胞膜片具有10-300μm的厚度。在一些实施方案中，所述间充质干细胞膜片具有15-250μm的厚度。此外，本发明的间充质干细胞膜片可以具有不同的细胞层数。在一些实施方案中，所述间充质干细胞膜片具有1-15层细胞。

在一些实施方案中，本发明的间充质干细胞膜片具有1×10⁵至1×10⁷/cm²的细胞密度。在一些实施方案中，所述间充质干细胞膜片具有3×10⁵至5×10⁶/cm²的细胞密度。

本发明的间充质干细胞膜片的表面积和形状没有任何限制，并且其表面积和形状可以根据应用的场景和培养的方法而变化。