[发明专利]间充质干细胞膜片及其制备方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞膜片，所述膜片不含有支架材料并且不含有血清组分，其中所述膜片中间充质干细胞的细胞比例为至少90％。

2.如权利要求1所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片中充质干细胞的比例为至少95％。

3.如权利要求1或2所述的间充质干细胞膜片，其中所述间充质干细胞来源于选自以下的组织：羊水、羊膜、绒毛膜、绒毛膜绒毛、蜕膜、胎盘、脐带血、华通氏胶、脐带、成人骨髓、成人外周血和成人脂肪组织。

4.如权利要求1或2所述的间充质干细胞膜片，其中所述充质干细胞选自脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。

5.如权利要求4所述的间充质干细胞膜片，其中所述间充质干细胞是脐带间充质干细胞。

6.如权利要求1-5中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片使用传代数为P0-P20的间充质干细胞制备。

7.如权利要求6所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片使用传代数为P2-P10的间充质干细胞制备。

8.如权利要求1-7中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片的厚度为10-300μm。

9.如权利要求1-8中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片中的细胞密度为1×10⁵至1×10⁷/cm²。

10.如权利要求9所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片中的细胞密度为3×10⁵至5×10⁶/cm²。

11.如权利要求1-10中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片中的间充质干细胞通过其分泌的细胞外基质彼此连接。

12.如权利要求11所述的间充质干细胞膜片，其中所述细胞外基质富含整合蛋白和黏连蛋白，例如纤连蛋白和整联蛋白-β1。

13.如权利要求1-12中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述膜片具有表面和基底面，所述基底面富含细胞连接蛋白。

14.如权利要求1-13中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述间充质干细胞具有分化潜能，能够高效分化为骨、软骨和脂肪细胞。

15.如权利要求1-14中任一项所述的间充质干细胞膜片，其中所述间充质干细胞能够高效分泌多种血管生成因子和免疫调节因子。

16.如权利要求15所述的间充质干细胞膜片，其中所述血管生成因子和免疫调节因子包括白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、前列腺素E2(PGE2)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素生长因子、基质细胞衍生生长因子-1、色氨酸代谢酶(IDO)和一氧化氮合酶(iNOS)的一种或多种。

17.一种制备间充质干细胞膜片的方法，所述方法包括：

a.提供间充质干细胞；

b.在无血清培养体系中培养和传代所述间充质干细胞；

c.将所述间充质干细胞转移到粘附基质预包被的温敏培养皿中；

d.待间充质干细胞附着于所述培养皿并生长一段时间后，通过降低温度使间充质干细胞从所述温敏培养皿脱离，

其中所述间充质干细胞通过其分泌的细胞外基质彼此连接，从而获得间充质干细胞膜片。