[发明专利]一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法

说明书

本发明公开一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，通过检测不存在于人体细胞但存在于支原体细胞内的ATP生成酶的活性，来检测临床样品中是否含有肺炎支原体，从而判断是否为肺炎支原体感染。本发明方法包括将临床样品洗脱后、分别与试剂Ⅰ和试剂Ⅱ接触，温育后再分别测定与两混合物中的ATP信号，并计算信号比或净信号，以此推断临床样品中是否含有肺炎支原体，进而判断是否为肺炎支原体感染。试剂Ⅰ含有ATP检测成分，试剂Ⅱ除了含有ATP检测试剂及能够通过人体细胞中所不存在的酶产生ATP的组分，且所述试剂Ⅰ、Ⅱ均为基于荧光素酶的生物化学发光试剂。本发明方法与现有技术相比不仅操作简单方便、速度快，而且具有较高的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法。

技术背景

支原体肺炎(MP)是下呼吸道感染肺炎支原体所引起的。肺炎支原体是一种无细胞壁的类似细菌的微生物。与医院获得性相比，高达20％的社区获得性肺部感染是由肺炎支原体所引起的。肺炎支原体感染的常见临床症状包括持续性干咳、持续性低烧、喉咙痛、不适、轻度呼吸急促和肺炎。在极少数情况下，感染还可导致关节炎、心包炎、神经系统疾病、脑炎、肾衰竭、溶血性贫血、皮肤病和耳病等。

已知有200多种肺炎支原体能够感染人类。尽管有有效的抗生素可用于有效的治疗，但有效治疗及正确使用抗生素需要及时准确的诊断。由于肺炎支原体感染的临床症状类似于其他病原体的感染，准确诊断困难。例如，链球菌和嗜血杆菌等其他细菌和病毒(包括副流感病毒和流感病毒)的感染的症状，与肺炎支原体感染的临床症状非常相似，因此很容易与它们混淆。而使用有效的抗生素治疗，必须依赖于及时准确诊断是否是肺炎支原体感染。

目前，可用的肺炎支原体感染测试包括血清学测试和核酸测定等。其中，血清学检测主要针对菌种存在相应的抗体(IgG和/或IgM)。此外，也有报道称开发了用于检测类似细菌性抗原的快速检测方法。但所有这些检测方法都存在缺点。例如，用于检测针对肺炎支原体的抗体的血清学测试法不能用于急性期的诊断，因为通常需要一周时间才能出现可检测的抗体；抗原测定通常又缺乏灵敏度；基于核酸的分子测定法操作更是复杂且昂贵，使其不适合在门诊情况下使用。

因此，亟需一种能够准确快速诊断肺炎支原体感染的方法，其不仅检测速度快而且操作简单，易于临床使用，并且成本低廉。

发明内容

鉴于上述现有肺炎支原体检测技术存在的缺陷，本发明提供一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其既不检测临床样品中肺炎支原体的抗体，也不检测抗原或来自肺炎支原体的核酸，而是检测不存在于人体细胞但存在于支原体细胞内的ATP生成酶的活性，从而确定是否为肺炎支原体感染。具体技术方案如下：

一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，包括步骤如下：

a)反应Ⅰ：将一定量的临床样品与试剂Ⅰ接触，所述试剂Ⅰ含有用于检测ATP的成分；

b)反应Ⅱ：取与反应Ⅰ中等量的临床样品与试剂Ⅱ接触，而所述的试剂Ⅱ除了含有足量的与反应Ⅰ中成分相同的用于检测样品中ATP的组分外，还含有通过人体中所不存在的ATP生成酶产生ATP的组分；

c)温育：将步骤a)和步骤b)中配制的反应混合物，分别在适当的温度下温育一段时间；

d)测算信号比：分别测量反应Ⅰ和反应Ⅱ中的ATP信号，并计算反应Ⅰ信号与反应Ⅱ中的ATP信号的比值或净信号，通过信号比或净信号来判断样品中是否存在肺炎支原体。

前述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，还包括样品洗脱步骤，即将所述临床样品在与试剂Ⅰ或试剂Ⅱ接触前经过含有非离子洗涤剂的样品缓冲液进行洗脱处理。所述的样品包括从患者咽喉收集的临床样品、痰液或从疑似肺炎支原体感染患者的肺部采集的样品。所述缓冲液中非离子洗涤剂的浓度可引起细胞膜的溶解或穿孔但不会引起细菌细胞壁的溶解或穿孔。